豫医无毛小鼠皮肤毛囊细胞凋亡及NCAM表达的研讨.pdfVIP

动物实验 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 M A a1．Characterizationofimmune of [12]Roman JY，PerryH，et responseyoungpigs P，Kyoung to circovirus2 porcine typeinfection[J]．ViralI埘mun，2000，13：14—153 L L S of cireovirusassociatedwith [13]AndreH，LihuaL，GopipN，Nucleotidesequenceporcine postweaning syndromein Viorl，1998，5262—5267． multisystemicwasting pigs[J]．J [14]林万明，医学分子微生物进展(第二集)，北京，人民军医出版社 豫医无毛小鼠皮肤毛囊细胞凋亡及NCAM表达的研究 朱奎成，章金涛，杜春燕，王纯耀，邢金山 (郑州大学实验动物中心， 郑州450052) 【摘要】目的研究豫医无毛小鼠皮肤毛囊细胞凋亡及NcAM在毛囊发育中的表达。方法以不同日龄小鼠背 部皮肤为标本，采用TUNEI法检测豫医无毛小鼠和昆明小鼠皮肤细胞凋亡；以NCAM单克隆抗体为一抗，进行免疫 组织化学染色。结果(1)豫医无毛小鼠毛母质和毛乳头均有细胞凋亡，昆明小鼠仅毛母质细胞凋亡。(2)同 昆明小鼠相比，豫医无毛小鼠毛乳头部位NcAM表达信号较弱。结论无毛基因可能通过诱导小鼠皮肤毛乳头细胞 的凋亡而影响毛囊的正常生长发育。 【关键词】无毛小鼠；皮肤；免疫组织化学；凋亡 现代遗传学研究常通过改变动物基冈或细心观察并结合科学的方法及时捕捉有价值的突变 信息构建动物模型，以满足生物医学研究的需要。无毛小鼠是一种皮肤和被毛结构发生遗传突变 的小鼠，国外已发现影响皮肤和被毛结构的基因达70多个…，其中引起小鼠被毛异常的达30多个， 育成品系20多种姑1，已广泛用于皮肤病理、皮肤肿瘤、皮肤老化、脱毛、老年皮肤病学等方面的 Yihairless 研究∞。。豫医无毛小鼠(Yu mice，YYHL)是郑州大学实验动物中心于上世纪90年初在 昆明小鼠繁殖群中发现的无毛小鼠，经实验证实为常染色体上的单一隐性基因突变所致，现已育 成国内唯一的豫医无毛小鼠分离近交系H刊。豫医无毛小鼠皮肤表型、组织学结构、无毛基因DNA 序列分析已有了相关研究报导”引，而有关无毛小鼠毛囊生长受阻的机理还不清楚。本研究结合毛 囊的正常生长发育机制及国内外的相关文献旧11|，采用TUNEL法和免疫组化技术检测了豫医无毛小 鼠皮肤毛囊细胞凋亡及NCAM在皮肤毛囊上的表达，并与昆明小鼠进行了对比分析，以探讨无毛小 鼠皮肤毛囊退化机理，为豫医无毛小鼠在生物医学研究中的应用提供理论依据。 l 材料与方法 1．1 实验动物 无毛小鼠及对照昆明小鼠来自郑州大学实验动物中心饲养的豫医无毛小鼠分离近交系。一级 环境条件下饲养，温度控制在20～28℃，控光12L：12D，自由饮水、采食。 1．2 试剂 细胞凋亡检测试剂盒，鼠抗人NcAM单克隆抗体免疫组化试剂盒，购自博士德生物工程有限 公司。 1．3 方法 1．3．1 细胞凋亡的检测 1．3．1．1 切片制备分别在21日龄、4月龄和9月龄断头处死无毛小和昆明小鼠各2只，取背部中 um。 央皮肤以中性福尔马林液固定，酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片，切片厚3～5 1．3．1．2 原位末端标记染色A．石蜡切片，常规脱蜡至水，蒸馏水5min，PBs液冲洗。B．微 W、4min， 波增透：将已脱蜡再水合的组织切片分开放人盛有微波增透液烧杯中，调微波功率300 微波增透结束后的水