甲苯二异氰酸酯致小鼠睾丸脂质过氧化损伤及标志酶活性变化研讨.pdf

持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 甲苯二异氰酸酯致小鼠睾丸脂质过氧化损伤及标志酶活 性变化研究 季宇彬，于蕾，郎朗 (哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究发展中心，黑龙江，哈尔滨150076) 1引言 甲苯二异氰酸酯(Toluene 染物，主要是对呼吸道的刺激，TDI是公认的工业致敏原，其致职业性哮喘作用早已得到人们的重 视。因而国内外的研究多集中在其对呼吸系统的损伤方面，对TDI的雄性生殖损伤研究较少。为 了探讨TDI对雄性生殖系统的致毒机理，本研究以呼吸道染毒的小鼠睾丸为对象。观察了睾丸组 织细胞抗氧化能力及睾丸标志酶的变化，旨在探讨TDI对小鼠睾丸毒性的作用机制，为进_．步研 究TDI吸入对人类生殖毒性作用及其机制提供理论依据。 2材料与方法 2．1材料 离心机(北京医用离心机厂)：QL一861型涡旋混合振荡器(上海博停经贸有限公司)：HH·S恒温水浴； 2．2动物分组和染毒方法 鼠进行呼吸道染毒。连续染毒两周，每天4H。根据报道TDI经呼吸道染毒的半数致死浓度(LC50)为 9．7ppm／4H(相当于75．42mg／m3)，设四个染毒剂量37．71mg／m3、18．86mg／m3、9．43mg／m3、4．30 LC50、1／4LC50、1／8 mg／m3，前三者相当于1／2 人用药量换算求得，与1／16 LC50相近。另设阴性对照组。 2．3睾丸组织匀浆的制备 于染毒后第15天处死小鼠，称取动物体重后处死动物，取双侧睾丸，用冰冷的生理盐水漂洗， 制成质量分数为10％的睾丸组织匀浆混悬液取出上清液置于．20℃保存待测。同时计算其脏器系数， 公式如下 00％ 脏器系数(％)=脏器湿重(g)／体重(曲×1 2．4测定指标和方法 蛋白含量的测定采用考马氏亮兰法；SOD活性测定采用邻苯三酚自氧化法；MDA活性测定采 作按照试剂盒说明进行。所有数据用SPSSl1．0进行方差分析。 3结果与讨论 3．1TDI染毒对小鼠睾丸组织氧化损伤的影响 139 持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 表lTDI染毒对小鼠睾丸组织氧化损伤的影响 注：表中·与空白对照组比较，Po．05。¨与空白对照组比较，PO．01 由表1可见，TDI染毒两周后，随着染毒剂量的增加SoD的活性降低明显，1／2、1／4、1／8LC50 染毒剂量时，SOD活性的降低与空白组比较呈非常显著性差异(p0．01)；随着染毒剂量的增加，1／2、 1／4 LC50染毒 LCso染毒剂量组MDA含量增加显著，且与空白组比较呈非常显著性差异(po．01)，1／8 呈显著性差异(p0．05)。 3．2TDI染毒对小鼠睾丸标志酶及睾丸脏器系数的影响 由表2可见，TDI染毒两周后，1／2、1／4LC50染毒剂量组ACP、ALP的活性下降显著，且与空 白组比较呈非常显著性差异(p0．01)；随着染毒剂量的增加，睾丸脏器系数有所下降，但与空白组 对比无显著性差异。 表2TDI染毒对小鼠睾丸标志酶及睾丸脏器系数的影响(n=8，X+s) +与空白对照组比较，Po．Ol 4结论 本实验结果表明，小鼠经呼吸道染毒TDI后，引起了睾丸组织内的自由基反应，破坏了细胞 的氧化代谢过程，造成细胞和组织的损伤。主要表现在GSH、MDA、SOD三种关键的抗氧化酶含 量的改变上。 GSH是体内重要的非酶性抗氧化物质，GSH的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要标志。本 研究证明，TDI吸入体内后可产生各种氧自由基消耗GSH，使得GSH水平下降，从而导致睾丸组织对 氧化损伤的敏感性增加。1／2 LC50TDl吸入组的小鼠GSH下降明显，可能由于TDI吸入后首先被GSH 等抗氧化物质所吸收，并与之发生反应，生成活性氧自由基(超氧离子、羟自由基)攻击细胞膜上不 饱和脂肪酸(PUFA)，引起脂质过氧化