试验用ERICPCR区分副鸡嗜血杆菌杆菌Page血清型研究.pdfVIP

1999年全国兽医微生物学学术年会论文集 S对-2月6 试验用ERIC-PCR区分副鸡嗜血杆菌Page血清型 SK2刘 陈小玲’;M.Khan` I.北京市农林科学院畜牧兽医研究所 北京 100089 z.美国康奈狄格大学病理生物学系 摘 要 为进一步发挥PCR技术在禽病诊断上的 血清型的成功经验 自、‘它的关键是设计血清型特异 优越性、解决传统血清学检验存在的司题，我们试验 rs引物。这样的引物或来自血清型特异性基因序列. 用ERIC-PCR签因分型方法鉴定H.Paragalli- 或从随机序列筛选。到目前为止我们对Hpg血清型 narum的3个Page血清型或选择血Ar型特异佳 特异性基因以及它们的DNA序列仍不很清楚 公认 DNA片段。试验结果显示10个Page和Kume血请 为有血清型特异性的HA基因曾被克隆并表达，但 型标准菌株产生出7个ERIC-PCR类型,8个Page 未进一步测序列 ，‘)。ERIC-PCR，也叫肠细菌基因 A型野外分离株产生出5F`ERIC-PCR类型。iz些 内共有重复序列PCR,是根据最先发现于肠细菌，以 类型与Page血清型没有关系，也不存在某个血清型 后证明在其他许多G-菌及一些G-菌染色体DNA 菌株特有 的片段。4个非Hpg菌株各有其不同的 中也有的小片段重复序列设计引物，扩增各重复序 ERIC-PCR类型，它们与Hpg的指纹图谙也没有肯 列之间DNA片段的PCR，是一种非常简单的PCR 定的界限。ERIC-PCR 的确在菌株水平上区分了 菌株遗传分析方法。在此我们试验能否用这种方法 Hpg，这说明它可能在流行病学研究中起作月。 找出区分Hpg的Page血清型的线索。 关健词 ERIC-PCR,血清型 ，副呜嗜 t牙菌 1 材料和方法 1.土 菌株 Page和Kum。血清型标准菌株由 鸡传染性鼻炎(IC)是由副鸡嗜血杆菌 (H. Blackall博士赠送，但KumeB-1型菌株未能参加 paragallinarum,Hpg)引起的鸡上呼吸道传染病 几 试验。除血清型标准菌株外 还用了南非NAT)非依 年前我们从鸟枪法克隆开始建立了一种鉴定Hpg的 赖型HPG552(PagcA型)分离株，由南非的Bragg 种特异性PCR方法，并在实践中证明它优于传统细 博士赠送 国内分离株7株(PageA型)来自中国兽 菌分离方法(，2，。这个方法已在国内外儿个实验室 药监察所冯文达先生和我们实验室。另外有P.vol- 使用，取代了鉴定Hpg的生化试验;在没有条件做细 untium,P.haemolytica，分别由Blackall博士和康 菌分离或无须知道血清型的情况下它已成为诊断 Ic 奈狄格大学病理生物学系诊断室赠送。Mmp-yaasl 的依据。但有时我们仍需要鉴定血清型，以便选择同 galliaepticum，M,synoviaeDNA由康奈狄格大学 Tj的疫苗 〔目前国内外可用的只有灭活菌苗，而它们 Fadle博上赠送。 只能预防相同Page血清型Hpg的感染)。此外在进 1.2 培荞基和培养条件 山于当时 _【作的实验室 行流行病学研究时也需要鉴定血清型。为此我们拟 没有部分Hpg培养基所用试剂，临时设计了这一培 研究用PCR方法对Hpg进行血清型鉴定 柬克服传 养基，即 PLOI 培养基 。.。火，胰陈 1/0a.酵母粉 统的血清学试验需要分离培养细菌、制备扰原、制备 1叮，味梢IX.N.Cl0.5%.葡萄糖 。.2%,PH7.4。肉 抗血清，对付交叉反应和不可分型菌株、费力费时等 汤培养基用前加 3/0鸡血清，琼脂培养基用前加5% 一系列问题。