疯牛病和养痒病WESTERN BLOT检测方法的建立研究.pdf

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 ’ 为动物源性TSE的诊断和确定提供了实验基础。TSE的共同神经病理改变是在脑组织中出现海绵状空泡变 性和淀粉样斑块沉积田l。有研究利用重组的人朊蛋白研究Pd”构象转换，正常的pec变为高度可溶性的、 富含单体B折叠结构的prps。。且具有部分抗蛋白酶消化的活性12…。 致病性PrP生物学鉴定主要依据脑内接种金黄地鼠后观察特征性的病理学变化p…。因此，本研究选择 金黄地鼠接种实验，旨在研究证实重组PrPc蛋白是否具有致海绵状空泡变性和淀粉样斑块沉积特性，以便 黄地鼠86天后即可发病p…。本研究将重组PrPc脑内接种金黄地鼠，观察102后，未出现特征性I临床症状 取物，观察重组PfPc的致病性是否需要更长时间有待进一步研究。 索重组PrP。及PrP。蛋白是否具有类似特性，我们对此进行了初步研究。传统研究基因表达水平的方法包 括Southern blotting、DDRT-PCR等。近年来出现的实时荧光定量PCR(real．1imequantitativePCR)技术实 现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应 等优点成为了分子生物学研究中的重要工具．Real-timeRT-PCR的应用范围很广泛，包括mRNA表达的研 究、DNA拷贝数的检测、单核营酸多态性(SNPs)的测定等。 在研究重组PrP。的生物学特性的同时，探索金黄地鼠PrP。基因表达规律。进而为研究PrP”获得更充分的 基础试验数据。结果表明所有检测样品获得的标准s形曲线CT值无显著差异，说明对照组地鼠脑组织 Prion 时间内未能引起地鼠脑组织海绵状病理变化，术能引起PrPcmRNA表达水平改变，为进一步研究PrP。重 组蛋白结构生物学提供了基础数据。 。， 参考文献略 疯牛病和养痒病WESTERNBLOT检测方法的建立 王辉暖赵德明杨建民周向梅 (中国农业大学国家动物海绵状脑病实验室北京 100094) 动物传染性海绵状脑病(Transmissible Spongiform Ence 致死性、传染性和神经系统退行性脑病，主要有：等瘁病(Scrapie)，牛海绵状脑病(BovineSpongiform phalopmhy，BSE)或麋鹿慢性消瘦疾病(Chronic Wasting Prion (CelluarProtein PrP。。)，这种蛋白质由正常基因编码，目前牛羊鹿等许多动物的PrP基因己经获得 14．5 61,其蛋白质通过糖基化位点【3‰定于多种细胞表面的糖蛋白”““】。传染性海绵状脑病的发生是由机 体正常编码PrP基因袭达的细胞型朊蛋蛋白发生构象的变化而导致的㈣，在疾病发生过程中，PrP”作为 模板诱导作为基础分子的PrPo发生构象的改变，由原来的螺旋结构转变为具有蛋白酶抗性的．折叠结构， 井在中枢神经系统聚集，引起动物传染性海绵状脑病的发生¨．2。11。在PrP。向转化prpsc的过程中，没有 其它的病原和核酸参与这一过程【l…。动物传染性海绵状脑病的病理变化主要集中在中枢神经系统，与正常 神经细胞相比其空泡样变十分明显，神经元中有单个或多个大小不等的空泡，星状胶质细胞增生、肥大， 病变在脑干灰质部两侧呈对称状分布I”J 动物海绵状脑病(TSE)作为国际重大疫病，在欧洲等地大面积暴发，给当地的畜牧业带来极大的危害。 933 牛羊传染病 TSE具有高度的传染性、跨国流行，直接危及动物或人类健康，影响全球经济发展、社会进步和政治稳定。 动物海绵状脑病，制定了跨国动物疫病紧急防御系统计划，要求各成员国承担防范、抵御、控制、根除规 定的跨国疫病，以防止有害生物疫源的扩散