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离体培养技术在果树种质 资源保存中的研究进展 张妮石雪晖 韩艳婷蔡桂华 王美军 (湖南农业大学园艺园林学院410128) 摘要果树种质资源是果树育种及品种改良的重要物质基础。本文概述了果树种质资源离 体培养常用的缓慢生长保存和超低温保存两种方法，简要阐述了果树种质资源保存的研究 进展。 关键词果树种质资源离体培养缓慢生长保存超低温保存 果树种质资源是发展果树生产，开展果树育种工作及其他研究的物质基础。但随着人 口的急剧增长，不合理的开垦荒地，大面积毁林，加之现代工业污染，环境生态平衡遭到严重 破坏，一些珍贵、稀有的物种以及具有抗逆性的地方栽培品种已经灭绝或濒于绝种。因此， 果树种质资源保存已成为全球性关注的课题。 果树种质资源保存的方法很多，大体可分为两大类：一类是原境保存，另一类是异境保 存，如田间基因库及离体基因库。但野外保存果树种质资源存在着不可避免的缺陷：(1)大 量的种质栽培需占用大面积土地，管理费用也较高；(2)易发生自然变异和种质退化，从而影 响种质的遗传品质。 物界的高度重视。离体培养保存果树种质技术的优点是：(1)占用很小的空间，可以保存大 量的基因型；(2)培养物可免除病毒和病原菌的感染；(3)易于快速繁殖；(4)易于运输和交 换，且因处于无菌状态而容易检疫；(5)只需很少的保养，节省劳力和物资。 目前，国内外有不少关于果树离体种质保存的报道，涉及的果树种类主要有苹果、葡萄、 梨、猕猴桃、草莓、柑橘等，使用的保存材料有试管苗、茎尖和分生组织、花粉、种子、胚、体胚、 愈伤组织、悬浮细胞等，所采用的保存方法主要包括两种方法：一是缓慢生长保存，延长试管 苗在培养基上的生长期限，达到短期和中期保存的目的。另一种是超低温(一196℃)保存。 使保存材料的生长长期处于基本停滞的状态，达到长期保存的目的。 1 缓慢生长保存 缓慢生长保存，是指改变培养物生长的外界环境条件，使细胞生长降至最小限度，但不 死亡，从而达到延长继代培养时间的目的。这种保存方法的最大优点是使保存材料维持不 断生长，取出部分材料进行鉴定或用于育种之后，其不足部分可由余下的材料补充。限制细 胞生长技术的途径主要有：降低培养温度、调整培养基养分水平、添加化学物质、降低培养环 境中氧含量等。多数情况下，综合上述几种途径进行缓慢生长保存。 1．1常温及低温保存 主要是通过采用改变温度来减缓保存材料的生长，通常有常温20±5℃、常低温0一15℃ ·129· 品牌与现代高效果业 和低温一80～O℃。在常温下对于一些热敏感的果树和热带果树效果比较明显。在低温保 存植物培养物过程中，正确选择适宜低温是保存后高存活率的关键。研究表明，不同植物乃 至同一种植物不同基因型对低温的敏感性不一样。通常认为，温带植物在0～6℃下保存，而 热带植物最适低温为15～20℃。 1．2调整培养基养分水平 植物生长发育状况依赖于外界养分的供给，如果养分供应不足，则延缓植物生长，所以 通过调整培养基的养分水平，可有效地限制细胞生长。柑橘茎尖培养物在含1．5％蔗糖培养 基上保存效果最好。因此，有人建议，对于热带作物，可用这种方式代替低温保存。 1．3在培养基中添加化学物质 在培养基中加入一些生长延缓剂来延缓或抑制细胞生长，改变培养材料的生长速度，延 长继代周期。常用的生长抑制剂种类有：氯化氯胆碱(矮壮素，CCC)、N，N-二甲基胺琥珀酸 酸等。高效唑显著抑制葡萄试管苗茎叶的生长从而促进根系的加粗，提高根冠比，使试管中 扦插的葡萄茎段产生极度缩小的微型枝条，宜于试管内中、长期保存；适宜含量的脱落酸也 具有延缓葡萄试管苗的生长效果，可用于葡萄试管苗的常温保存，延长转接时间。 1．4降低培养环境中氧含量 降低培养环境中氧气浓度或培养基中氧分压，能减慢培养材料的生长速度。最简单的 方法是在保存材料上加盖一层矿物油，如液态石油、石蜡、硅酮油等，从而使供给材料的氧气 量降低。这种方法可以在常温下进行，对于冷敏感的热带水果较实用。在低氧浓度 个月和10个月，仍然保持良好的再生能力。 2超低温保存 超低温保存是指在一80℃(干冰温度)到一196。C(液氮温度)甚至更低温度下