不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗基因枪轰击诱导小鼠细胞免疫的研讨.pdfVIP

禽娄传染席 本研究结果发现，同一长度的启动子．在两种细胞中的转录活性有差异。在．470～+10 区域，CEB中转录活性与一1336～+10活性相当，而在CEF中活性极低．两者的差异极显著。 利用软件进一步分析， ．470～．176区域中有很多淋巴细胞特异性的转录调节元件结合区。 位点，其对于免疫反应、淋巴细胞增殖、凋亡意义重大l若干CRE(cAMP-∞sponsivcelement) 结合位点，其对很多基因有调节功能。可以推测，正是这些关键的结合位点使得vIL8蛋白淋 巴细胞特异性表达。这些元件的存在也暗示：vIL8mRNA的表达可能由体内的免疫因子调 节。 MDV本身就是嗜淋巴性病毒，vIL8的这种淋巴组织特异性有其重要意义：当病毒感染 淋巴组织形成病灶后，淋巴细胞特异性表达的vIL8能很好的靶向性趋化病灶外周淋巴细胞， 迅速扩大病毒感染灶，为最终形成淋巴瘤奠定基础。因此，该启动子的组织特异性可能对vIL8 发挥功能有重要意义，有关研究尚需进一步深入。 参考文献略 不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗基因枪轰击诱导 小鼠细胞免疫的研究 卢菲1，程安春1·r，汪铭书1·”。韩新锋。，黎敏1’车茜1，列晓东1．J嗥孝跃1t2 (1．四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心，四川，雅安．6250i4；2．动物疫病与人类健康四川省重 点实验室．四川，雅安，625014) 小鼠，以删A3．1(+)和生理盐水为对照，于免疫后3、7、14、2l，28．35．49、63，77、105d采血 用淋巴细胞转化实验(hfrT法)和流式细胞仪(FAcs】分别检测小鼠外周血T淋巴细胞转化效果和CD4+， cD8+T淋巴细胞动态变化．结果表明pcDNA-GPv-vP3以基因枪轰击逢往免疲小鼠能够诱导机体产生起好 的细胞免疫应答．且pcDN枷Pv．vP3免疫小鼠后除谤导的cD8+T淋巴细胞免疫功能备组问无显著性差 异外，外用血T淋巴细胞对cor晴刺激的反应，谤导cD4+T淋巴细胞免疫功能．6雌组最强，3pg组 擞之．1llg蛆较差，且三个蛆之问存在一定竹荆量相关性． 关键词小鹅瘟病毒vP3基因疫苗基因枪轰击小鼠细胞免疫 小鹅瘟(GoslingPlagIle，GP)叉称鹅细小病毒(G00sePar、，ovims’GPV)感染或Derzsy’s vims，GPV)引起的一种主要侵害小鹅和雏番鸭的高 病，是由小鹅瘟病毒(GoslingPlaglle 度接触性传染病．以严重腹泻、肠道出现纤维素性、出血性和坏死性炎症为主要临床和病理 特征，是严重危害养鹅业的重要传染病之一．每年都有不同程度的流行，给养殖户造成了相 当大的经济损失。GPv基因组的右侧开放阅读框架编码三种结构蛋白(VP)，即VPl、VP2、 VP3，其中vP3约占GPv衣壳蛋白的78．5％．是GPV主要的免疫原性蛋白，也是研制基因 工程疫苗的首选基因【lJ．基因枪轰击作为一种有效的免疫途径已被大量研究所证实例。本文 将我们前期构建的小鹅瘟病毒VP3基因疫苗(pcDNA乇PV．VP3)以不同剂量基因枪轰击免 疫小鼠，采用淋巴细胞转化实验(MTT法)和流式细胞仪(FAcS)分别检测小鼠外周血淋 巴细胞转化效果和cD4+、cDl+T淋巴细胞动态变化，为阐明小鹅瘟病毒vP3基因疫苗以基 因枪轰击途径诱导小鼠细胞免疫发生的机理提供实验数据。 l材料与方法 1．1质粒及疫苗 基因正向插入pcDNA3．1㈩多克隆位点中的真核表达质粒，由本实验室构建，采用碱裂解法 ‘为通讯作者 840 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 大量制备并经聚乙二醇．Mgcl2法纯化． 1．2实验动物 近交系4周龄雄性BALB庀小鼠，每只体重18-22g．ELIsA检测血清GPV抗体为阴性， 购于四川大学动物实验中心． 1．3主要试剂 公司产品)；淋巴细胞分层液(上海华精生物高科技有限公司)；溶血素自行配置； 557307，553030)： 1．4主要仪器 1000，}Ie 基因枪(PDs system型．BIO-RAD产品公司)：高压氮气管和高压氦气管(动 物疫病及人类健康四川省重点实验室保存)；酶联免疫检测仪(ELx800型。Bio-钯k公司)： 流式细胞仪(BDFAcS