丙酸产生菌的筛选、鉴定及培养条件研讨.pdfVIP

专题：13 生物过程工程与控制 丙酸产生菌的筛选、鉴定及培养条件研究 李燕波, 张边江* (南京晓庄学院生命科学系 江苏 南京211171) 摘要：从奶酪中筛选得到一株高效丙酸生产菌XZ1 。经形态学特征、生理生化特征分析及16S rDNA 全序 列同源性比较，鉴定该菌株属于费氏丙酸杆菌（Propionibacterium freudenreichii ），将其命名为 P.freudenreichii XZ1 。对该菌的培养条件进行了初步研究并对发酵产物进行有机酸分析。实验结果表明，以 玉米浆为有机氮源（40 g/L ），葡萄糖及乳酸为复合碳源（各20 g/L ）时，丙酸产量达18.9 g/L，与副产物 乙酸的比例为4:1 。 关键词：丙酸；费氏丙酸杆菌；筛选；鉴定；培养条件 中图分类号：Q93 文献标识码：A 1 前言 丙酸（Propionic acid ，PA ）是一种重要的精细化工产品和基本化工原料，丙酸及其衍 生物广泛应用于食品、饲料、医药等领域[1-3] 。丙酸的生产方法有化学合成法和生物发酵法， 丙酸的工业化生产方法主要以石油基乙烯为原料化学合成丙酸。目前国内外的研究热点是采 用微生物发酵法来生产丙酸，以减少人们对石油等不可再生资源的依赖，利用发酵法代替化 [4] 学合成法生产丙酸是大势所趋 。 菌株生产能力是限制生物基丙酸生产的主要瓶颈之一，丙酸产生菌多集中于丙酸杆菌属 （Propionibacterium ），目前国外已有较多报道，内容主要涉及菌种改良、新型反应器、耦 合发酵工艺等方面[5-7] ，其中Jin Z 等通过补料分批耦合发酵丙酸产量达75 g/L[7] 。与国外相 比，国内对于丙酸产生菌的报道较少，乐华爱、谭蓓英等人分别筛选得到了丙酸杆菌，产量 分别为9.4 g/L、6.5 g/L[8,9] 。仪宏等研究P.shermanii 批式发酵丙酸时产量达20.9 g/L ，但丙 [10] 。总体来 酸对于葡萄糖的转化率仅为 40 ％（丙酸对葡萄糖、乳酸理论转化率为54.8% ） 讲，国内发酵法生产丙酸的水平与国外存在一定的差距，因此，筛选具有自主知识产权的高 产丙酸菌株对于我国具有重要的社会、经济意义。 副产物是丙酸生产过程中存在的另一个问题，在生成丙酸的同时，常伴随有乙酸、琥珀 酸等副产物的生成，其中丙酸与乙酸的生成比例，根据菌种、培养条件而变化，以葡萄糖、 作者简介：李燕波(1986-), 女, 汉族, 江苏省常州人。通讯作者: 张边江, Tel: 025 E-mail ： zhangbjiang@. 乳酸为基质发酵丙酸和乙酸的生成比大多在2:1 左右[11,12] 。Suwannakham S 等利用基因工程 的手段试图敲除乙酸激酶的活性，弱化乙酸支路，但效果并不明显，乙酸生成量仅减少了约 [5] 。筛选副产物较少尤其是乙酸含量较少的的菌株对于丙酸的生产极为有利。 14％ 本文主要涉及从奶酪中筛选得到一株高效丙酸产生菌 XZ1 ，并对其进行鉴定、培养条 件优化及产物分析研究，该菌株具有转化率高、副产物含量低等优点，具有很好的应用前景。 2 材料和方法 2.1 培养基及培养条件 2.1.1 培养基 富集培养基A （g/L ）：乳酸20 g ，玉米浆20 g ，碳酸钙1 g，pH 6.9 。 富集培养基B （g/L ）：甘油20 g ，玉米浆20 g ，碳酸钙1 g，pH 6.9 。 分离培养基（g/L ）：乳酸20 g ，玉米浆20 g ，琼脂20 g ，pH 6.9 。 发酵培养基 （g/L ）：碳源，玉米浆，(NH4) SO 3 g ， KH PO 2 g ，NaCl 0.5 g ， 2 4 2 4 MgSO ·7H O 0.2 g ，碳酸钙40 g ，pH 6.9 。 4 2 2.1.2 培养条件：厌氧条件下，32 ℃静置培养。