肝支架单层微结构系统设计与制造研究.pdfVIP

肝支架单层微结构系统设计与制造 李涤尘 贺建康 刘亚雄 卢秉恒 刘鹏飞 (西安交通大学机械制造系统工程国家重点实验室 西安 710049) 摘要：肝支架是肝组织工程的细胞载体，其微结构的设计与制造是实现肝组织工程的基本环节，也是对微 制造技术新的挑战。通过模拟自然肝脏的微结构，进行肝组织工程支架的仿生设计；应用微压印工艺制造 肝组织工程支架单层结构。肝脏支架内存在三种形态的微观结构——光滑微管(血管) 、微孔(肝细胞)及二 者之间的半通透孔。提出了卷裹型和组装型两种设计结构。实验得出肝脏支架材料的最佳制备工艺性的配 比：壳聚糖和明胶比例为1/3，生物胶浓度为12%～13%，溶剂选用4% 的醋酸溶液。其配比可以保证肝支 架有良好制造工艺性足够的机械强度。在单层微结构微压印过程中，加压涂敷一次完成，制备了支架微系 统单层结构。 关键词：肝 组织工程支架 微压印 0 前言 肝脏是人体最大的腺体，具有代谢﹑胆汁分泌﹑解毒净化等重要作用，是人体最大的 “生化加 工厂”，但各种肝病常导致肝脏发生严重的器质功能性改变。肝脏移植是最有效的治疗手段，然而供 体的匮乏一直制约着肝脏移植，全世界每年肝移植数量也仅4～6 万例；肝细胞移植能在一定程度上 修复肝脏功能，但由于移植途径、细胞数量、局部微环境以及免疫排斥反应等因素的限制，至今未 能在临床上广泛开展；人工肝支持系统(ALSS)作为肝移植前的过渡手段，虽完成过滤、净化、解毒 等单一功能，但难以提供连续的治疗，无法代替人体肝脏的全部生化作用。 为解决肝脏供体与肝脏移植需求的矛盾，降低肝脏移植带来的昂贵费用，从生物工程的角度设 计制造培养出可供移植的活性人工肝组织是势在必行的，也成为组织工程领域的研究热点。肝组织 工程综合考虑肝细胞、生长因子、基因、细胞外基质、支架材料及其微观结构等因素，利用工程技 术制造支架，以哺乳动物的肝细胞粘附，在体外通过肝细胞的培养生长，实现肝组织器官的工程化 制造，解决肝移植手术中供体匮乏的问题。肝组织工程支架不仅要为细胞粘附与细胞增殖提供场所， 为新组织的生成提供支持，而且是细胞获得营养物质，排出代谢产物的渠道，从而保证肝细胞的生 长与繁殖，以实现肝组织的正常功能。因此，肝组织支架的设计与制造，特别是其内部微观结构的 设计制造是肝组织工程需要解决的基本问题。 1 肝组织微结构的仿生设计 内皮细胞 正常肝脏内存在着大量由内皮细胞构成的血窦 肝细胞 —一种特化的血管网，呈辐射状分布在中央静脉周围 和肝细胞(索)之间。血管壁上开有许多小孔，其尺度 血管 允许血细胞通过并与肝细胞( 直径在 15～35m)发生 作用，从而实现肝细胞的功能表达。在正常机体内， 胆管 内皮细胞和肝细胞遵循发育生物学和再生生物学的 规律，形成上述特有的结构；而在体外培养时，依赖 图1 肝组织微结构 于支架形成类似自然肝脏的微结构。因此，肝组织工程对支架结构的基本要求是：支架内应存在三 种形态的微观结构——光滑微管、孔洞及二者之间的渗透孔。微管供内皮细胞贴壁生长形成血管(血 窦) ；孔洞供肝细胞聚团生长形成肝细胞索；半通透孔是尺度更小的微观结构，其大小应使血浆(或营 养液)通过，但对肝细胞和内皮细胞有一定的阻隔作用。 依据肝组织微结构，肝组织工程支架至少须设计出三种不同的微结构：供肝细胞团聚生长的微 孔洞，具有双向物质交换功能的半通透孔和供内皮细胞贴壁生长形成血管的微管道。为了满足肝脏 的功能要求，同时便于制造，对肝脏支架的结构进行工程简化，以下两种是主要的设计方案。 1.1 卷裹型肝支架设计 裹肝支架将肝细胞孔洞，半通透膜和血管管道分开设计，然后将三者组装在一起半通透膜夹于 其间，即可起到双向物质传输作用，又可防止肝细胞进入血管。研究表明，肝脏内部肝细胞团的尺 寸为：300～400m ，在此基础上，设计了多种不同尺寸的肝脏支架，图2 为设计的血管管道和肝细 胞孔，具体尺寸如图所示。 (a) 肝支架微观设计图