MiRNA与转录后调控.pptVIP

3.2 miRNA调控造血干细胞的分化 3种miRNA控制造血干细胞向淋巴细胞的分化过程 miR142S miR223 Science 303(5654):83-86,2004. Northern杂交确定了miR-375在INS-1细胞的表达 miR-375在部分糖尿病模型NOD小鼠的异常高表达 （阳性率60%） 反义2’-O-甲基化寡核苷酸技术，特异性抑制 miR-375 不同浓度葡萄糖刺激经2’-O-me-eGFP(375)处理后INS-1细胞胰岛素的分泌 立论依据 ——实验基础 Mtpn在 INS-1细胞、正常小鼠和NOD小鼠的差异表达 4. miRNA基因异常与肿瘤发生相关 人类52％的miRNAs定位在染色体的脆性位点(FRAs) 61个miRs和FRAs定位在同一染色体带(红色星表示),红色箭头表示癌症病例中观察到的频率较高的FRAs. PNAS 101(9):2999-3004,2004. 人核型图显示113个FRAs和186 miRs的位置关系 某些定位在染色体的脆性位点(FRAs)的miRNAs与肿瘤的发生有关 PNAS 101(9):2999-3004,2004. Nature 435(7043):834-838,2005. microarray显示肿瘤和正常组织中129种miRNA的表达水平 众多肿瘤miRNA整体表达水平下降 let-7与肺癌的关系 正常肺组织中let-7非常丰富；但肺癌中let-7表达水平普遍下降 人RAS是let-7的靶基因。体外证实let-7抑制肺癌细胞系的增殖。 肺癌组织中let-7表达不足，RAS过度表达，癌细胞增殖迅速. Cell 120(5):635-647,2005. N. Engl. J. Med. 352(23):2446-2448,2005. Nature 435(7043):828-833,2005. 淋巴癌中miR-17-92簇的表达水平 转miR-17-92簇小鼠迅速诱发全身癌变，小鼠死亡加快 normal miR-17-92簇可能是一种新的癌基因 Nature Med 11(7): 713-714,2005. a：miRNA过度表达，抑制了抑癌基因的正常表达； b：miRNA表达过少或缺失，不能有效抑制癌基因。 a b microRNAs通过对抑癌基因和/或癌基因的调控 与肿瘤的发生相关 动物中miRNA的功能 miRNA 靶基因 功能 品种 lin-4 lin-14 线虫幼虫发育时间控制 线虫 lin-28 线虫幼虫发育时间控制 线虫 Let-7 lin-41 线虫幼虫发育时间控制 线虫 Lin-57/hbl-1 线虫幼虫发育时间控制 线虫 Lsy-6 cog-1 控制左右神经对称性 线虫 miR-273 die-1 控制左右神经对称性 线虫 Bantam hid 通过刺激细胞分化和阻止凋亡，调控果蝇组织生长 果蝇 miR-14 ? 影响果蝇脂肪代谢和阻止凋亡 果蝇 miR-181 ? 控制小鼠造血作用 小鼠 miR-196a HOXB8 剪切靶mRNA 小鼠 miR-375 Mtpn 调控胰岛素分泌 人 mir-143 ERK5 脂肪细胞； 人 (IV) miRNA的研究方法 ● miRNA的寻找技术 ● miRNA的检测技术 ● miRNA功能的研究技术 1.miRNA基因的寻找 ○ 克隆构建small RNA库，进行筛选 ○ 电脑模拟进行同源性搜索 MicroRNA基因确认的基本原则 A.能够通过与特定大小的总RNA样品杂交得到～22nt的产物（即需要Northern杂交或引物延伸反应验证表达） B.所得的序列是从特定大小的（～22nt）的小分子RNA库中克隆到的，并且必需与克隆的来源物种的基因组序列完全匹配 C.经过前体的二级结构预测，有发夹状的二级结构，并且成熟的miRNA序列在发夹的一条臂上 D.成熟的miRNA序列与预测的二级结构在不同物种间有保守性 E.在Dicer突变的系统中，前体的积累增多 ▲ 理想的： A + D + E ▲ 充分的： A + D ▲ 必要的： A + C or B + D RNA 9:277-279, 2003 克隆建库寻找新的miRNA基因 克隆到的miRNAs经过杂交验证其表达 Science 299，2003  电脑进行同源性比对寻找新的miRNA基因 2.miRNA的检测技术 ○ 芯片技术 Microarray ○ 原位杂交 ○ 其它方法 应用芯片技术高通量的检测不同样品中多种miRNA的表达量的差异 NAR 33(2)，