一 基因工程的基本内容3.ppt

基因工程简介 第三章 第四节 一 基因工程的基本内容 主要内容 1）基因工程的概念 2）基因操作的工具 3）基因操作的基本步骤 什么叫基因工程？ 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 （一）基因工程的概念 （一）基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 实质 基因重组 基因工程培育抗虫棉的简要过程： （一）基因工程的概念 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ （二）基因操作的工具 关键步骤一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 基因的剪刀—— 限制性内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） 限制酶 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 ２、基因的针线——DNA连接酶 （二）基因操作的工具 作用：DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来 连接部位：磷酸二酯键 （二）基因操作的工具 ３、导入过程需要运输工具——运载体。 作用一：将外源基因转移到受体细胞中去。 作用二：利用运载体在受体细胞，对外源基因进行大量复制。 作为运载体必须具备的条件： 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 （如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。） 常用的运载体主要有两类： 1）细菌细胞质的质粒 2）噬菌体或某些动植物病毒 质粒： 质粒：核区外的DNA分子。 现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中核以外的DNA分子。 质粒是基因工程最常用的运载体。 绝大多数细菌质粒都是闭合环状DNA分子。有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。 大肠杆菌的质粒： 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒， 四个基本步骤： （三）基因操作的基本步骤 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 目的基因 （三）基因操作的基本步骤 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 （如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。） 目的基因的提取方法 直接分离基因 人工合成基因 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA 鸟枪法 （三）基因操作的基本步骤 １、步骤一：目的基因的提取 1）鸟枪法（散弹射击法）： 用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定发方法将目的基因的DNA片段分离出来。 1）鸟枪法（散弹射击法）： 供体细胞中的DNA 限制酶 许多DNA片段 载入 运载体 导入 受体细胞 外源DNA扩增 从中找出含有目的基因的细胞 将目的基因的DNA片段分离出来。 步骤一：目的基因的提取 2）反转录法： 目的基因的mRNA 单链DNA 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 步骤一：目的基因的提取 3）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列