烧伤合并内毒素血症对血小板的影响.docVIP

精品论文 参考文献 烧伤合并内毒素血症对血小板的影响 韩亚龙 陈宗华 魏迪南 刘文军 支燕 杨晖 韩大伟 　　（昆明医科大学第二附属医院烧伤科 云南 昆明 650101） 　　【摘要】 目的：探讨烧伤合并内毒素血症对血小板数量变化及骨髓细胞凋亡的影响。方法：采用小鼠总体表面积(TBSA)20%Ⅲ度烧伤合并内毒素(1mu;g/g体重)腹腔注射后动物模型，观察1周内小鼠外周血小板数量的变化并使用骨髓细胞原位凋亡检测(TUNEL)法观察骨髓细胞凋亡。结果：烧伤合并内毒素注射后12h内,血小板数量略增多，3～7天血小板总数显著低于对照组，烧伤合并内毒素组3天内骨髓细胞凋亡严重,骨髓凋亡率高于对照组，烧伤注射后早期,可见较多的凋亡阳性细胞。结论：烧伤合并内毒素血症早期就出现骨髓凋亡严重，外周血小板减少，与单烧组、单注组比较,具有抑制出现时间早、程度重、持续时间长的特点。 　　【关键词】 烧伤;内毒素血症;骨髓;血小板 　　【中图分类号】R644 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）06-0216-03 　　严重烧伤患者常因感染、肠源性感染内毒素易位等多种因素合并内毒素血症，是多器官功能衰竭的重要原因。烧伤合并内毒素可能对骨髓产生重要作用，对骨髓造血发生抑制，加重骨髓细胞的凋亡，从而影响外周血小板的生成。本研究观测了20% TBSAⅢ度烧伤合并内毒素(1mu;g/g体重)腹腔注射后1周内小鼠血小板的动态变化及骨髓细胞细胞凋亡变化，从内毒素骨髓抑制探讨烧伤引起血小板减少的原因。 　　1.材料与方法 　　1.1 实验动物分组和致伤 　　1.1.1动物分组 7～10周龄健康小鼠95只,体重22～24g(昆明医学院动物科提供), 将实验小鼠95只随机分为烧伤合并内毒素注射组（烧注组）、单纯烧伤组（单烧组）、单纯内毒素注射组（单注组）、每组每个时相点各5只小鼠，共90只小鼠，伤后6小时、12小时、1天、3天、5天、7天活杀取材, 其余5只注射生理盐水作为对照（对照组）。 　　1.1.2动物致伤 小鼠20%TBSAⅢ度体表烧伤按文献方法进行[1]。烧注组于烧伤后立即腹腔注射纯化脂多糖(LPS按1mu;g/g体重,2ml无菌生理盐水稀释)建立烧注组的实验动物模型；单烧组于烧伤后立即腹腔注射2ml无菌生理盐水；单注组除不造成体表烧伤外,余同烧注组；对照组动物背部脱毛后腹腔注射2ml无菌生理盐水。 　　1.2 外周血小板的计数 　　建立实验动物模型后，按照实验设计时相点，摘除小鼠一侧眼球,取血1ml,加入带肝素抗凝试管,于全自动血细胞计数仪上计数血小板。 　　1.3 骨髓凋亡的检测 　　小鼠颈椎脱臼法处死动物,剥离出股骨、剪断，将其断面的骨髓挤在有稀释液的玻片上，混匀后涂片，甲醛熏蒸固定5分钟，流水洗净，自然风干，进行TUNEL标记后进行细胞检测。TUNEL 标记阳性细胞：观察细胞核及细胞质层次,细胞棕黄色标记的为阳性细胞,可因早期、中期和晚期凋亡而深浅不一。 　　2.计数方法 　　光镜下观察每张骨髓涂片头、体、尾，计数100个有核细胞中的阳性细胞数。TUNEL 法标记凋亡细胞阳性指数(简称凋亡率,apoptosis index, AI) = (凋亡阳性细胞数/ 100个细胞) times;100 %。 　　3.结果 　　3.1 血小板的变化 　　烧注组血小板伤后6、12小时略高于对照组无差别，但很快就下降，伤后1天达最低水平，第7天仍低于对照组，并于伤后1、3天显著低于单烧组和单注组。单烧组伤后6、12小时略有升高，以后开始下降，于伤后1、3、5天低于对照组。单烧组在伤后1、3低于单注组，单注组在伤后1、3低于对照组。见表1。 　　3.2 骨髓细胞原位凋亡的变化 　　TUNEL 标记阳性细胞特征：细胞核呈现特征性、深浅不一的棕黄色。细胞核及细胞质层次清楚。早期凋亡；棕黄色标记物呈细沙样散在于细胞上，染色质凝集，仅在核膜边缘呈现新月形式冠状棕黄色标记物，颜色较浅。中期凋亡；染色质固缩，颗粒状棕黄色标记物逐渐波及整个胞核，颗粒粗大，颜色较深，核形态仍完整。晚期凋亡；呈深棕色标记，可见核碎裂，或出现散在凋亡小体（见下图）。 　　TUNEL法检测结果显示：烧注组6、12小时1、3天小均可见较多的凋亡细胞，凋亡率显著高于对照组，以后至7天凋亡数量逐渐降低基本同正常对照组，6、12小时、1天凋亡率高于单注组。单烧组6、12小时3天小时可见散在分布的凋亡细胞，凋亡率显著高于对照组，单烧组6、12凋亡率高于单注组。单注组伤后6、12小时可见散在分布的凋亡细胞，凋亡率显著高于对照组，1天后凋亡细胞逐渐减少，7天仅偶见凋亡细胞同对照组。正常对照组偶