猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观察.docVIP

精品论文 参考文献 猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观察 金娟2 田伟1 ( 1 沈阳医学院基础医学院解剖学教研室 辽宁沈阳 1 1 0 0 3 4 ) ( 2 沈阳医学院基础医学院0 8 级临床4 班 辽宁沈阳 1 1 0 0 3 4 ) 【摘要】目的 制备脱细胞小肠黏膜下基质（small intestinal Submocosa） ，探讨其作为组织工程生物膜的可行性。方法 利用物理和化学方法制备猪小肠黏膜下层，利用光镜、图象分析对其进行观察及分析，皮下埋植观察生物相容性。结果 光镜显示，SIS的疏密层度逐渐加深，孔径率在70-90%之间，扫描电镜显示胶原纤维结构规整，网孔丰富，纤维连续。皮下埋植未见皮下明显的异物反应。结论 经过这种方法制备的SIS，韧性大，结构、层次分明，生物相容性良好，是一种理想的细胞支持架，是组织工程进行组织修复的良好材料。 【关键词】猪小肠黏膜下基质 生物学特性 观察 【中图分类号】R392.12 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）01-0395-02 1 材料和方法 1.1实验材料：猪小肠的回肠段，长度为10厘米（由沈阳医学院动物实验中心提供） 1.2实验方法： 1.2.1制备脱细胞小肠黏膜下基质： ⑴物理方法处理：取经过检疫的健康成年猪的小肠用清水冲洗干净后,挑选管腔粗细均匀、管壁无破损及无淋巴结的部位。先翻转小肠,使黏膜面向外,清除小肠黏膜层直至黏膜下层暴露,再次翻转小肠,清除浆膜和肌层组织。洗净小肠黏膜下层,完全去除小肠黏膜下层上的残留组织，其间持续用4℃水冲洗[1]。 ⑵化学方法处理：沿纵轴切开经物理方法处理的小肠，切成每段5c m长，将小肠段在4deg;C的1升0.2% TritonX- 100(sigma;化工有限公司、美国圣路易斯）含26.5mmol/ L的氨水中,浸泡7天。脱细胞后,用去离子水清洗72小时,之后将猪S I S 在-55deg;C冷冻48小时并使用环氧乙烷消毒(沈阳市中心医院)。双层PSIS支架纵向切出40times;50times;0.2 mm3进行植入。标本在- 80deg;C[2]贮存。 1.2.2小肠黏膜下基质的形态学观察： ⑴HE染色：取猪S I S膜，大小1c mtimes;1c m，10%的甲醛固定24小时，石蜡包埋，常规切片，做HE染色。 ⑵扫描电镜观察：取猪SI S 膜，置于预冷的2.5%戊二醛溶液内，浸泡12h，取出样品块放入0.1m o l/L磷酸缓冲液（p H7.2）中过夜，系列梯度酒精脱水，醋酸异戊酯置换，二氧化碳临界点干燥，真空喷金，JS M-T300扫描电镜观察并摄片。 ⑶透射电镜观察：取制备后的猪SI S，3%戊二醛固定,锇酸再固定,梯度酒精脱水后环氧树脂包埋,作透射电镜观察。 ⑷图象分析：取HE染色的石蜡切片，共9组，每组随机抽取10个切片，每个切片4个视野，用Luzex-F实时图象分析系统对实验结果进行图象分析，计算孔径大小及孔径率。 ⑸皮下埋植实验：取猪SIS膜，大小1cmtimes;1cm，Wistar大鼠，体重200g左右，40m g/k g戊巴比妥钠麻醉下，在背部中间，剪开大小为2cmtimes;2c m大小的皮窗，充分剥离背部肌肉的深筋膜，将SIS四角缝合于肌肉的表面，缝合皮肤，每隔一周取材，连续四周，石蜡包埋，HE 染色观察。 ⑹统计学处理：用S P S S11。统计软件对数据进行统计学分析，差异性显著性采用方差分析检验。 2 结果 2.1 光镜观察： HE染色观察，未见细胞结构，PS IS结构分布有一定的规律性，大致分为三个层次，A层，即靠近小肠黏膜一面，网孔较多，并且呈蜂窝状，向内侧，即B层，网孔的孔径逐渐变大，网孔率逐渐变小，最外层，即靠近浆膜面的C层，纤维平行排列，比较规整。（图1） 随着脱细胞液浓度的增加，SIS膜的结构逐渐变的模糊不清，胶原纤维镜下变的一片红色，失去正常形态，其中0.04N、0.06N、0.08N三组比较理想，以0.08组效果最好，结构紧凑，层次分明。0.1N的S IS结构开始松散，胶原纤维结构不清楚。0.12N和0.14N组结构完全被破坏。 图1.光镜下PSIS形态 2.2 扫描电镜观察： 扫描电镜观察可见管腔内面较管腔外面的网孔率明显增加，并且孔径比较小，结构致密。最外面表面非常致密，表面光滑，横断面可以看见S I S的结构层