盐酸法舒地尔防治大鼠肾脏缺血再灌注损伤的实验研究.docVIP

精品论文 参考文献 盐酸法舒地尔防治大鼠肾脏缺血再灌注损伤的实验研究 　国伟1 王盟1通讯作者 王盟通讯作者 孟建中2 伊忻1 　　（1济宁市第一人民医院 山东济宁 272111；2 济南军区总医院 山东济南 250031） 　　【摘要】目的 探讨盐酸法舒地尔防治大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)的作用机制。建立大鼠肾脏缺血再灌注(IRI)动物模型，随机将75只Wistar大鼠分成空白对照组(n=25)，IR模型组(n=25)，治疗组(n=25)，并观察5个时间点(6、12、24、48、72h)各组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血管内皮生长因子(VEGF)的水平变化；并采用免疫组化法检测RhoA蛋白表达。结果 表明：（1）IR组Scr、BUN水平于再灌注后6h开始升高，48h达高峰，治疗6h、12h、24h、48h、72h组均低于模型组(Plt;0.01)。(2)肾组织RhoA、VGEF表达于再灌注后6h开始升高，12h达到峰值，24h后下降，但均较对照组明显增加 (Plt;0.01)。(3)盐酸法舒地尔治疗组(F组) Scr、BUN、RhoA、VGEF表达均明显低于IR模型组(Plt;0.01)。盐酸法舒地尔可能通过阻断Rho/Rho激酶信号通路，减少VEGF的生成，抑制内皮细胞通透性，减轻肾脏缺血再灌注损伤。 　　【关键词】Rho激酶 缺血再灌注 血管内皮生长因子 盐酸法舒地尔 　　【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）39-0050-03 　　1 引言 　　缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)是引起自身和移植肾脏发生急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的主要原因之一，导致肾脏IRI的原因有心血管疾病、脓毒症、创伤、休克、脱水及外科手术等。研究发现肾缺血再灌注损伤时主要累及近端肾小管上皮细胞，引起结构和功能的破坏。近年来研究发现血管内皮生长因子(VEGF)特异性作用于内皮细胞(endothelial cells, ECs)，在诱导血管内皮细胞渗透性增加机制中起重要的作用。Rho/Rho激酶是具有信号传导和分子开关作用的信号多肽，参与血管平滑肌收缩、细胞分化及细胞凋亡等多种细胞功能[1]。目前有学者认为Rho/Rho激酶参与了内皮细胞的收缩[2]，增加了内皮细胞的通透性，是调控EC通透性改变的信号分子[3]。研究表明Rho/Rho激酶信号通路参与VEGF诱导的体外内皮细胞运动和血管生成[4]。盐酸法舒地尔作为一种Rho激酶特异性抑制剂，通过阻断Rho/Rho激酶信号通路具有扩血管、抗炎等广泛的作用。本实验通过观察盐酸法舒地尔对肾脏缺血再灌注损伤中血清Scr、BUN及肾组织RhoA、VGEF的影响，探讨其防治肾脏缺血再灌注损伤可能的机制。 　　2 材料和方法 　　2.1 试剂与材料 　　雄性Wista大鼠(由山东大学医学院实验动物中心提供)。盐酸法舒地尔注射液由天津红日药业股份有限公司提供 (2ml/支，30mg)。兔抗大鼠VEGF多克隆抗体试剂盒由美国NEO MARKER公司提供，兔抗大鼠RhoA多克隆抗体由美国Santa Cruz公司提供。 　　2.2 动物分组与模型建立 　　2.2.1 健康雄性Wista大鼠75只，体重270士10g，经适应性饲养1周后，随机分成3组：空白对照组，IR模型组，法舒地尔治疗组，每组各25只。3组大鼠分别再随机分成再灌注6、12、24、48、72小时5个不同时段亚组，每组各5只。 　　2.2.2 IRI模型建立：10%水合氯醛（3～5ml/kg）腹腔注射麻醉成功后，沿腹正中纵轴线做切口，暴露双侧肾脏，用无损伤微型动脉夹迅速阻断双侧肾动脉，肾脏由红色变紫黑色表示夹闭成功，共持续夹闭60min松开动脉夹。Con组：暴露双侧肾脏后，覆盖浸有生理盐水的纱布，60min后去除纱布后逐层关腹，缝合切口。IR组:建立肾脏IRI模型。F治疗组：同法建立IRI模型，在缺血再灌注前5分钟腹腔注射盐酸法舒地尔(30mg/kg)。 　　2.3 观察指标 　　2.3.1 血尿素氮、血肌酐：各组在相应时间点开服取静脉血5ml，分别检测血清Scr、BUN的含量。 　　2.3.2 免疫组化检测VEGF、RhoA 免疫组化方法采用辣根过氧化物酶标记的链酶卵白素染色法(SP法) 检测VEGF、R