敲低MSX2对胰腺癌PANC-.PDFVIP

J South Med Univ, 2015, 35(2): 179-184 doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2015.02.05 ·179 · 基础研究 敲低敲低MSXMSX22 对胰腺癌对胰腺癌PANC-PANC-11细胞上皮细胞上皮--间充质转化的影响间充质转化的影响 张登勇，马 翔，吴斌全，崔培元，刘会春，鲁 正 蚌埠医学院第一附属医院肝胆外科，安徽 蚌埠 233000 摘要：目的研究MSX2 基因在胰腺癌PANC- 1细胞的上皮-间充质转化（EMT）/间充质-上皮转化（MET）转变中的作用。方法 通过脂质体2000 将含有MSX2 干扰序列的质粒（共3 种，分别命名为shMSX2-1、shMSX2-2 和shMSX2-3 ，转染空质粒的阴性对 照组NC ）转染PANC- 1细胞，利用Real-time RT-PCR、Western blot 等技术检测MSX2 在基因和蛋白水平的表达，检测干扰效率， 并选取干扰效率最高的一组用于后续试验；进而检测EMT 相关上皮标志分子E-cadherin、间质标志分子Vimentin 在基因和蛋白 水平的表达变化；采用CCK-8法检测干扰前后细胞的增殖能力变化，Transwell 和划痕试验比较细胞的侵袭转移能力变化。结 果 3 组干扰质粒中shMSX2-1 的干扰效率最高，CCK-8试验结果显示敲低MSX2 可明显抑制PANC- 1细胞增殖能力，与对照组 相比差异有显著性（P0.05）；敲低MSX2 可明显抑制PANC- 1细胞的侵袭转移，差异有统计学意义（P0.05）；EMT 相关分子 E-cadherin 表达升高，而Vimentin 表达降低，且与对照组相比均有统计学意义（P0.05）；倒置显微镜下观察敲低MSX2 后细胞形 态由松散的长梭形变成紧密连接的椭圆形。RT-PCR 发现敲低MSX2 后转录因子twist 和snail 表达降低（P0.05），而slug 和 zeb 1表达变化无差异（P0.05）。结论 敲低MSX2 可抑制胰腺癌PANC 1 细胞的增殖、侵袭转移能力，并且上皮标志分子 E-cadherin 表达升高，间质标志分子Vimentin 表达降低，有发生MET 的趋势，MSX2 可能通过twist、snail发挥其抑制作用 关键词：胰腺癌；干扰；上皮间充质转化；MSX2 Effect of MSX2 interference on epithelial-mesenchymal transitions of pancreatic cancer cell line PANC-1 ZHANG Dengyong, MA Xiang, WU Binquan, CUI Peiyuan, LIU Huichun, LU Zheng Department of Hepatobiliary Surgery, First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu, Bengbu, 233000, China Abstract: Objective To investigate the effect of MSX2 interference on epithelial-mesenchymal transitions (EMT) of pancreatic cancer cell line PANC-1. Methods Three vectors containing short hairpin RNAs (shRNAs) of MSX2 (shMSX2-1, shMSX2-2, and shMSX2-3) and the empty vector (negative control) were transfected separately into PANC-1 cell line with Lipofectamine2000. Real-time RT-PCR and Western blotting were used to observe changes in the expressions of MSX2, E-cadherin, and vimentin in the cells. CCK-8 assay was used to assess the changes in the cell g