HPLCELSD法测定平贝母中贝母素甲的含量研究.pdfVIP

HPLC-ELSD法测定平贝母中贝母素甲的含量 洪梅 李秀芬 姜元甲 乔艳玲 吉林省药品检验所 吉林 长春 130062 马彧 吉林省四平市药品检验所 吉林 四平 130000 摘要 目的 建立测定平贝母中贝母素甲的含量测定方法 方法 采用高效液相色谱法 ELSD检测器 色谱柱为Reliasil C(4.6mm250mm)流动相为乙腈-0.02%三乙胺 5743 结果 精密度和稳定 18 性均良好 供试品溶液在24h内基本稳定 贝母素甲在0.61256ug6.1256ug范围内具有良好线性关 系 r=0.9992平均回收率为99.6重现性试验表明 本方法具有良好的重现性 空白试验表明 在HPLC图上贝母素甲峰相应的位置上无干扰 结论 本方法简单 专属 重现性好 可用于测定平 贝母中贝母素甲的含量 关键词 平贝母 贝母素甲 HPLC-ELSD含量测定 平贝母是百合科植物平贝母Fritillaria ussuriensis Maxim.的干燥鳞茎 具有清热润肺 化 痰止咳的功能 贝母类生物碱是贝母止咳化痰作用的主要有效成分 因而生物碱的定量分析方法对控 制其质量显得尤为重要 传统的定量方法常采用比色法 两相滴定法 非水滴定法对总生物碱进行测 定 有文献表明三种方法均有一定的局限性 采用薄层色谱法 反相离子对高效液相色谱法 柱前衍 生化法 气相色谱法对贝母素甲 贝母素乙进行定量 存在前处理步骤多 排除干扰困难等补足之处 而 ELSD是一种质量型检测器 对样品中贝母素甲进行含量测定 分离度好 样品制备简便 重现性 好 适于作为贝母药材的质量监控 1.仪器与试药 PE-200系列高效液相色谱仪 Alltech 2000蒸发光散射检测器 EChrom98色谱工作站 乙腈 为优级纯 纯净水 新鲜制备 贝母素甲对照品由中国药品生物制品检定所提供 2.方法和结果 2.1色谱条件 色谱柱 Reliasil C 5(4.6mm250mm)流动相 乙腈-0.02%三乙胺 5743流速 18 蒸发光散射检测器 漂移管温度87 载气流速2.3ml/min 2.2色谱系统适用性试验 理论板数按贝母素甲峰计算应不低于30000 2.3供试品溶液制备 取本品细粉 精密称取10g置具塞锥形瓶中 加入氯仿100ml氨水4ml放置过夜 加热回流 5小时 放冷 滤过 用氯仿洗涤滤渣5次 每次20ml合并滤液 蒸干 残渣加甲醇适量使溶解 定量转移至2ml容量瓶中 加甲醇至刻度 摇匀 即得 2.4对照品溶液的制备 精密称取贝母素甲对照品适量 精密称定 加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液 即得 2.5线性关系的考察 精密吸取贝母素甲对照品溶液 0.30628mg/ml 25 101520ul 按上述条件依法测定 以峰面积积分值的对数为纵坐标 进样量的对数为横坐标绘制标准曲线 线性关系测定结果 进样量对数值 -0.212850.185090.486120.662200.78715 峰面积对数值 2.805553.608794.0889740441484065571 回归方程为Y=3.22+1.836X r=0.9992 结果表明 贝母素甲在0.61256ug6.1256ug范围内具良好的线性关系 2.6稳定性试验 取同一批样品 产地 通化 在0h2h4h8h24h依法测定 结果见下表 稳定性试验结果 时间 h 0 2 4 8 24 贝母素甲含量 ug/g 30.46 30.7730.70 31.19 30.18 X=30.7ug/g RSD=1.10% 结果表明 供试品溶液在24小时内基本稳定 2.7精密度试验 取对照品溶液 连续进样5次 结果见下表 精密度试验结果 序号 1 2 3 4 5 峰面积值 7341.417660.817496.63 7521.267630.64 X=7530.15