HPLCMS测定人肝微粒体及尿中的大豆苷元及主要代谢产物研究.pdfVIP

HPLC/MS 测定人肝微粒体及尿中的大豆苷元及主要代谢产物 彭文兴 李焕德 周宏灏1 中南大学湘雅二医院临床药学研究室 长沙 410011 中南大学临床药理研究所 长沙 410038 摘要 目的 建立快速 高灵敏的方法测定肝微粒体中及人尿中大豆苷元(DDZ)及单羟基化代谢物(M1和 M2)方法 采用 Waters micromass ZQ液相色谱-质谱联用仪 色谱柱 液相 18 3.9mm150mm,5m;流动相 乙腈-1/1000的甲酸水,采用程序洗脱:首先乙腈与水的比例为 10%持续 -1 6分钟 然后在20分钟之内升至30%维持5分钟 再重新平衡至初条件 5分钟 流速1mlmin; 质谱 Micromass电喷雾质谱仪 离子源 ESI极性 检出模式 正离子 毛细管电压 3.0kV;脱 溶剂温度:350;源温度150;取样锥孔电压: 47V;萃取锥孔电压1.6V;离子能量:0.5 V;六极杆射频透 -1 镜电压:0.5V;倍增器电压650V;氮气流量:294Lh 结果 大豆苷元保留时间分别为10.54分钟 7 8 4三羟异黄酮 7 34三羟异黄酮 6 7 4三羟异黄酮的分子量均为 270在 M/Z271选择离 子通道上的保留时间分别为6.94, 8.65, 9.13分钟 不同浓度的7 34三羟异黄酮 6 7,4三羟 异黄酮和大豆苷元 按样品处理法处理 与测定峰面积为横坐标 与浓度为纵坐标 进行线性回归 线 性关系良好 日内及日间误差小于 10%DDZ在肝微粒体及尿的最低检测限分别为 2.0ng ml- 1 和 0.2 g ml- 1, 代谢物7 34三羟异黄酮 M167,4三羟异黄酮 M2在血尿中的检测限均为0.04 g ml- 1 DDZ 与M1 及M2 的血尿回收率大于80 日内及日间回收率大于80 结论 该方法简单 灵敏 可靠 适合体外和体内大豆苷及其代谢物的药代动力学研究 关键词 大豆苷元 单羟化代谢物 HPLC-MS Determination daidzein and its major metabolites in human liver microsomes and urine using HPLC/MS PENG Wen-xing1 LI Huan-de1 ZHOU Hong-Hao2 1Department of Clinical Pharmacy, The Second Xiangya Hospital, Central South University,Changsha 410011; The Clinical Pharmacology Institute, Central South University, Changsha, 410078, Hunan ABSTRACT Aims: To establish a rapid and sensitive HPLC/MS method for simultaneous determination concentration of daidzein and its mono-hydroxylation metabolites in microsomes in human liver. Methods: Chromatographic separation was achieved on a C18 reversed-phase column using a gradient elution with acetonitrile and 0.1% formic acid