药物毒理学讲座-2010.ppt

(2)哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 细胞：哺乳动物原代或传代培养细胞。 剂量：至少应有三种不同剂量，高剂量以50％细胞生长抑制浓度为基准，否则应说明选择剂量的理由。 标本制作时间：药物与细胞接触后应有适当时间，最好包括整个细胞周期，通常在药物处理后24和48h制作染色体标本。 代谢活化：应用适当的代谢活化法。 对照组：用溶媒作阴性对照，已知突变原作阳性对照。 镜检：每种浓度至少观察100个中期分裂相细胞的染色体结构的异常及多倍体的出现率。 结果判定：受试物诱发的染色体畸变出现率较阴性对照有统计学意义的增加，并有剂量反应关系时记为阳性，同时标明异常细胞出现的频率和种类。 (3)体内试验：一般选用微核试验，但作用于生殖系统的药物进行显性致死试验等。 1)啮齿类动物微核试验 动物：一般用小鼠，每组10只性成熟动物(♀♂各半)或至少6只性成熟♂动物。 给药剂量及途径：至少采用三种剂量，最高剂量以1/2LD50为基准，腹腔和/或口服一次给药，必要时可连续给药、否则应说明选定剂量的理由。 对照组：用溶媒作阴性对照，已知能诱发微核阳性的物质作阳性对照。 标本制作：给药后18~30h或12~72h处死动物，取骨髓，离心，涂片，Giemsa染色或吖啶橙染色。 镜检：每只动物至少观察计数1000个多染红细胞和正染红细胞的比率。 结果判定：微核细胞出现的频度与对照组相比有统计学意义的增加，并有剂量反应关系时，或同一剂量有重复性并有统计学意义时记为阳性。 2)啮齿类动物显性致死试验 动物：性成熟的啮齿类动物，一般采用小鼠。每组至少15只♂鼠。 给药剂量及途径：至少采用三种剂量，但在初期评价中单剂量或二种剂量即可。高剂量以30d连续给药使100％动物生存的最大耐受量为基准。口服或腹腔注射可采用一次给药，每天给药一次，连续给药5d或连续给药6W的方法之一。 交配方法：给药的♂♂动物以适当的时间间隔依次与未给药的♀动物交配，交配时间取决于给药方式，一般一次或连续给药5d的动物，以最后给药后6W内为交配时间；连续给药6W的动物以最后给药后1W内为交配时间。 对照组：用溶媒作阴性对照，已知能诱发显性致死阳性物质作阳性对照。但在同一实验室，对同一品系的动物，可不设阳性对照。 观察指标：交配的♀动物在妊娠后期剖腹，观察子宫内胚胎着床数，生存胎仔数，死亡胎仔数及未着床数。显性致死率以DL表示：DL(100％)＝[1－(试验组妊娠鼠的平均生存胎仔数/阴性对照组妊娠鼠的平均生存胎仔数)]×100 结果判定：死亡胎仔数的增加，胚胎着床总数的减少，或未着床胚胎数的增加，生存胎仔总数减少，这些结果有统计学意义并有剂量反应关系时记为阳性显性致死效应。 当上述三项致突变试验结果难以下结论时，可选择其他补充试验予以确证。 2．生殖毒性试验 所用药物至少应有2~3种剂量并设对照组。高剂量可产生轻度毒性反应，低剂量应为人临床拟用剂量的若干倍。给药途径原则上与推荐临床应用的给药途径相同，口服制剂应用灌胃法。 (1)一般生殖毒性试验 动物：一种或一种以上试验动物，如用小鼠或大鼠每组♀♂各20只以上。 给药时期：选择性成熟的动物，交配前♂动物连续给药60d以上，♀动物连续给药14d。♀动物在确定已经交配后继续给药至多数胚胎器官发生期。 检查：给药的♀动物与给药的♂动物同笼饲养期限最多2W。必要时给药动物可以和非给药动物分别交配。已交配的雌性动物，推定其妊娠末期及时解剖，观察妊娠的确立、胎儿的吸收和死亡及子宫内活胎的发育情况，并进行形态学检查(性别、外表及内部器官的形态学观察及骨骼透明标本的检查)，必要时进行组织学和组织化学的详细检查。给药的♂动物及未交配上的♀鼠均作剖检，必要时进行病理组织学检查。 (2)致畸胎试验 动物：至少一种动物。一般采用小鼠或大鼠，每组15~20只孕鼠，家兔每组8~12只孕兔。 剂量：至少有2~3种剂量。并另设对照组，高剂量可有轻度毒性反应，低剂量应以拟议中的治疗量的某些倍量。 给药途径：与推荐临床应用的给药途径相同，口服制剂应用灌胃法。 给药时期：胚胎的器官形成期。 检查：全部动物在妊娠末期剖检，观察妊娠的确立，有无死胎和吸收胎及子宫内活胎的发育情况