慢病毒重组体对结肠癌干细胞“干性”的影响研究.pdfVIP

堕 笠 I-12／慢病毒重组体对结肠癌干细胞 “干性”的影响 第2期 · 16l· doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2013．02．011 人 IL．12／慢病毒重组体对结肠癌干细胞 “干性的影响① 尹晓玲 王正中② 赵银晶 陈华俊 杨晓琼 梁后杰③ (重钢总医院肿瘤科，重庆 400081) 中国图书分类号 R730．73 文献标识码 A 文章编号 1000-484X(2013)02-0161-07 [摘 要] 目的：构建并鉴定人白介素 12(Interleukin．12，IL．12)一慢病毒过表达重组体，观察其在结肠癌干细胞 (Cancer stemcell，CSCs)中的表达及其作用，为后续动物试验做准备。方法 ：PCR扩增 pORF—hIL．12质粒获得 IL一12基因．通过双酶切 及连接后构建 IL一12／慢病毒过表达重组体；分离鉴定结肠 CSCs，将 IL一12／慢病毒过表达重组体转染结肠CSCs建立 IL一12过表 达模型，检测 IL一12在结肠 CSCs的表达及对结肠 CSCs“干性”的影响。结果：PCR、酶切鉴定及测序证实 IL一12／慢病毒过表达 重组体构建正确 ，流式细胞仪成功分选出CD133 CD44 SW480结肠 CSCs．IL一12／慢病毒转染结肠 CSCs后 ，RT—PCR及 West— ernblot证实结肠CSCs培养上清均有 IL一12表达，IL一12抑制结肠CSCs自我更新，促进其分化。结论：IL一12／慢病毒过表达重 组体能在结肠 CSCs中稳定表达并能抑制结肠 CSCs自我更新及分化。 [关键词] 人白介素 12重组体；构建；癌症干细胞；表达；干性 Theeffectsofhuman IL．12．1entiviralrecombination on “stemness” ofcolon cancerstem cells YINXiao—Ling，WANGZheng—Zhong，ZHAOYin—Jing，CHENHua—Jun，rANGXiao—Qiong，LIANGHou—fie．De— partmentofOncology，theGeneralHospitalofChongqingIronandSteelGroup，Chongqing400081，China [Abstract] Objective：Toconstructandidentifyhumaninterlukin一12一lentiviralover—expessionrecombinant，andtoohserveIL一 12expression incoloncancerstem cellandtheeffectsoncoloncancerstem cell，prepareforcontinuedanimalexperiment．M ethods： TheobjectivegeneIL一12wasgotafterpORF—hlL一12plasmidwasamplifiedthroughpolymerasechainreaction．theIL一12一lentivirus over—expressionrecombinantwasconstructedthroughenzymedigestionandconjunction；Conloncancerstem cellwasseparatedand identified．andthecellmode1ofIL一12over—expressionwasestablishedaftercoloncancerstem cellsweretransfectedwithIL一12一lenti— viursover—expressionrecombinant．theexpressionofIL一12 incoloncancerstem eellwasdetected．and theeffectesofIL一12 on the “ stemncss”(self-renewalandeelldifferentiation)ofcoloncancerstem cellwasobserved．Results：IL．121entivirusover．expressionre— combinantwasconstructedcorrectlyconfirmedbyPCR，enzymedigestionandsequencing；CD133 CD44