耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药特征.docVIP

精品论文 参考文献 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药特征 朱青川 (福建省漳州市中医院检验科 363000) 【摘要】目的 了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性 方法　采用纸片扩散法检测MRSA对抗菌药物的耐药分析。结果　MRSA的检出率为34.13%(43/126),多数菌株具有多重耐药性,但对万古霉素、氯霉素和复方磺胺甲口恶唑较为敏感。结论　MRSA具有多重耐药的特征。 【关键词】葡萄球菌 金黄色 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌(SAU)是临床上常见病原菌,其对抗菌药物的耐药性日趋严重,特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的出现及流行,使得原来用于治疗该类细菌感染的多种抗菌药物, 如beta;-内酰胺类、酶抑制剂复合抗菌药物及碳青酶烯类药物不再具有疗效。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院内感染常见的病原菌之一,检出的MRSA一般呈多重耐药性,增加了治疗困难,已成为日益严重的临床问题。有关医院内感染中MR-SA研究的报道较多[１-２], MRSA的甲氧西林耐药决定簇(methicillin resistant deter minant,mecA)位于葡萄球菌盒染色体mec(staph ylococcal cassette chromosome mec,SCC mec)上,该结构类似于转座子,可以介导mecA基因游离传播,使敏感的葡萄球菌获得甲氧西林耐药性;部分SCC mec还携带有其他多种耐药基因,是MRSA多重耐药性产生的重要遗传学基础[3-4]。 1　材料与方法 1.1　材料 1.1.1　菌株来源　2005年6月—2006年6月,广州、深圳和湖南省部分地区临床分离的金黄色葡萄球菌(无重复)共126株,分离自126例患者。其中116例依据2006年9月卫生部颁布的《医院感染管理办法》附则确定为医院内获得性感染。采用法国生物梅里埃API Staph试条进行细菌鉴定。金黄色葡萄球菌质控菌株为ATCC25923。 1.1.2　试剂与药敏纸片　青霉素(PEN)、苯唑西林(OXA)、头孢西丁(FOX)、红霉素(ERY)、克林霉素(CLI)、氯霉素(CHL)、环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AMK)、妥布霉素(TOB)、庆大霉素(GEN)、利福平(RIF)、四环素(TET)、复方磺胺甲口恶唑(SXT)和万古霉素(VAN)药敏纸片及MH(MuellerHinton)琼脂或肉汤培养基,为英国Oxoid公司产品;DNA分子量标准、聚合酶链反应(PCR)反应试剂,购自TaKaRa公司;细菌染色体DNA提取试剂盒Wizard genomic DNA preparation kit,为Promega公司产品。 1.2　方法 1.2.1　MRSA的检测　采用K—B纸片扩散法。根据2005年版美国临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)M100—S15文件推荐的方法进行操作和判读结果,即采用OXA(1mu;g)或FOX(30mu;g)纸片、M—H琼脂35℃培养24h,抑菌环直径le;10mm或19mm时,判定为MRSA阳性株。 1.2.2　药敏试验　采用K—B法及E—test试条进行药物敏感性判定及MICs值检测。药敏结果根据2005年版CLSI M100—S15文件推荐的标准进行判读。 1.2.3　菌株染色体DNA的提取　采用Wizardgenomic DNA preparation kit提取金黄色葡萄球菌染色体DNA;细菌裂解步骤反应体系中另加入葡萄球菌溶菌酶0.5mu;g/mL和RNase0.3mu;g/mL。 1.2.4　多重PCR扩增[4]　反应体积为50mu;L,含1times;PCR反应缓冲液,1.5mmol/L Mg2+,200mmol/L dNTPs,引物各0.4mu;mol/L,Tap酶1.25U,DNA模板约10ng;反应参数:94℃预变性4min,94℃40s,53℃40s,72℃1min,循环35次,最后72℃延伸4min。 1.2.5　PCR产物分析　采用琼脂糖凝胶电泳法,以DNA分子量Marker DL2000为分子量标准,在含0.5mu;g/mL溴乙锭的1.5%琼脂糖凝胶中电泳后,用凝胶成像系统观察结果并照相。 1.2.6　统计学分析　采用chi;2检验进行样本率的比较。 2　结果 2.1　MRSA检出率126株受试菌中,分离自痰液88株(69.84%),血液13株(10.32%),脓性分泌物21株(16.67%),腹水4株(3.17%)。