传染性支气管炎病毒中国分离株S1基因的克隆及变异分析研究.pdfVIP

禽类传染病 将5％IBV)(J-2株尿囊液接种单层鸡胚肾细胞，在接毒96h以后出现明显的细胞皱缩、 脱落的病变；不加IBVⅪ-2株尿囊液的细胞在96h后未出现任何病变。细胞发育一直正常。 2．1．3对鸡致病力试验 对试验鸡通过滴鼻、气管注入等途径进行攻毒，观察14天，结果见表2(略)。 2．2免疫原性测定 将mv]u-2株的抗原接种1月龄非免疫鸡后，分别于22天和“天采血，分离血清．用 ELISA方法和HI方法检测IB的特异性抗体．结果见表3和表4(略)。 3小结和讨论 本试验对鸡胚、非免疫鸡和鸡胚肾细胞的致病力试验表明，IBVxJ．2株可以致鸡胚出珊 典型的传染性支气管炎病毒所致的病理变化，即鸡胚卷缩和僵化．EID50为1矿加．1ml；致 试验鸡出现典型的呼吸系统的症状；在接毒后96h就引起鸡坯肾细胞皱缩、脱落，对鸡胚肾 细胞具有很强的致病力，表明mvxJ．2株具有较强的毒力。 本试验用乳化的IBvⅪ．2株抗原液接种非免疫鸡，分别用HI方法和ELIsA方法对22 天和“天的免疫抗体进行检测，结果显示IB的ELIsA抗体效价达到2269，IBHI抗体效 价达到6．1Lo啦，表明IBvXJ．2株具有良好的免疫原性，可以刺激机体产生特异性的免疫抗 体，同时也说明用mvxJ-2株制备疫苗预防鸡肾型传染性支气管炎的可行性。 近年来，新疆一些养鸡场虽然接种了鸡新城疫一传染性支气管炎二联弱毒活疫苗，但以肾 脏肿大、腹泻为主要症状的鸡肾型传染性支气管炎的病例不断增加。由于该病病程欧．很难 用药物治愈，给新疆养鸡业造成很大的损失。鉴于新疆地区肾型传染性支气管炎的多年流行， 本试验旨在从新疆分离株中筛选出优良的肾型IBv制苗毒株，使疫苗的免疫效果更具有针 对性。本试验研究结果表明肾型鸡传染性支气管炎病毒IBvxJ_2株不仅具有较强的毒力， 而且具有良好的免疫原性．是一良好的IB制苗备选毒株。 参考文献略 传染性支气管炎病毒中国分离株S1基因的克隆及变异分析 胥翠萍．张国中+．赵缝勋 (中国农业大学动物医学院．北京100094，E．唧珂：zIl蛐ggz@c叫．cdu．∞) 摘要2003年至2005年阐，从中国各地不同的免疫炭稿鸡群分离到多株传染性支气管爽病毒(IBv)． 选取其中的四个典型毒株对葬sl基圈进行了克隆和洲序分析．四椿分离毒s1基目的核苷酸和氨基酸序列 同潭性舟于88．98％和99．28％之间，与14椿IBv标准株的核苷蕺和真基酸序列同_；秉性为70．06~81．40％． 选取14株mv标准株和2003~2005年已在O锄B柏k上登录序列的其它31株中国分离株绘制的系统进化树 显示．近几年中国IBv分离株可基本上划分成四个主要的基因群，中国分离株中61．29％属于第四基因群， 谊群与4，9l槔县有一定的相关性，尤其在免疫原性和中和位点上，是目前申霉IBV流行的主要类型，揭示 4丹I型疫苗时中国养禽生产具有重要作用． 关键词传染性支气管史病毒：分离株；S1基因：序列分析 鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科冠状病毒属的传染性支气管炎病毒(IBv)引 起的目前危害全世界养禽业的主要疫病之一。近几年在中国．免疫鸡群也频繁发生IB，引 起严重的经济损失。IBV通过病毒中和试验已发现有二十多种血清型，IBV基因的变异导致 免疫失败给养禽业带来了严重的问题。 IBv基因组长约27kb，编码四种主要结构蛋白；纤突蛋白，小囊膜蛋白，膜蛋白和核 蛋白．纤突蛋白即S蛋白由sl和S2两个亚单位组成。中和抗体和血清型特异性抗体主要 针对sl蛋白“‘21，s】基因上甚至微小的变异都可能会导致疫苗的交叉保护性。“。1发生很 大变化。IBv分子生物学特性的鉴定主要是分析Sl蛋白基因。 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第+二次学术研讨会 为了调查中国鸡群传染性支气管炎病毒不同血清型的流行状况．我们从疑似IB发生鸡 群分离病毒进行鉴定，并选择有代表性病毒分析S1基因的序列，可为了解目前中国鸡群IB 流行状况提供依据，以利于防止养禽生产中IBV的感染。 l材料与方法 1．1病毒及血清 动物所病毒室保存。SPF鸡和sPF鸡胚由山东省农业科学院家禽研究所提供。本研究所用 分离毒株的基本情况如表l所示(略)。 1．2引物设计与合成 约 1596bp。上游引物：5’-AcTGAAcAA从GAcA，cGAcTT．3’；下游引物： 5’-