蛋白质辅助基质提高激光解吸电离多肽离子化率和绝对强度的研究.pdfVIP

V01．28 高等学校化学学报 No．5 2007年5月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 889～893 蛋白质辅助基质提高激光解吸／电离多肽离子 化率和绝对强度的研究 卓慧钦1’2，黄河清1”，翁露娜1’，黄慧英1，2 (1．厦门大学生命科学学院细胞生物学肿瘤细胞工程教育部重点实验室， 2．化学化工学院固体表面物理化学国家重点实验室，厦门361005) serum 摘要人血清转铁蛋白(Human∞mmtransferrin，HTF)、牛血清白蛋白(Bovinealbumin，BSA)、鲨鱼肝 liver ferritin，SZLF)、马脾铁蛋白(Horsespleenferritin，HSF)均能辅助基质提高激光 铁蛋白(Sphyrnazygaena acidic peptide，AP)离子化率和质谱峰的绝对强度 解【骠}／电离胰岛素(Insulin，INS)和海兔酸性多肽(Aplysia (简称为绝对强度)，其中绝对强度分别提高10和4倍，这一现象不依赖于INS浓度，而与蛋白质类型和结 含量对这种效应无明显影响，主要取决于蛋白质的氨基酸组成与结构．采用胶内酶解和肽指纹技术(PMF) 对强度均有明显增加，进一步提高了数据库鉴定f11【F的可信度． 关键词MALDI．TOFMS；多肽；绝对强度；辅助基质；肽指纹图谱 文献标识码A 中图分类号0629．72；Q51 电喷雾电离质谱和基质辅助激光解吸电离(MALDI)质谱是目前用于分析生物大分子过程中最常 用的软电离技术，主要用于分析非挥发性、热不稳定性且相对分子质量较大的生物大分子，并迅速成 为研究生物大分子的组成、结构与功能的关键性分析技术之一【l，2J．MALDI—MS分析生物大分子中的一 个关键因素是选择合适的基质．基质主要作用是将来自于MALDI—MS的脉冲激光能量瞬时传递给待测 生物大分子形成分子离子或准分子离子，并供质谱分析．目前高效基质的种类很少，常用于分析多肽 基质的研究也有报道[3】，例如2．氨基．5．硝基噻唑等．目前，已对数百种有机化合物进行基质功能的筛 选，但只有少数化合物适合作为基质，从而限制了通过选择不同基质的途径达到提高生物大分子离子 化率和绝对强度的效果．尽管如此，筛选或选择具有耐高盐浓度和高电离率特性的基质一直是提高 MALDI．MS检测多肽、蛋白质信噪比和质谱峰绝对强度的有效方法之一【4娟J． 在改善检测多肽与蛋白质分辨率和获得较高灵敏度等的诸多方法中，去除高丰度蛋白质、降低盐 浓度干扰、选择最佳基质及实行表面增强等技术是目前MALDI—MS的常用方法M川j．在扩大检测范围 方面，适当添加果糖、葡萄糖、海藻糖等有机糖能达到提高信噪比的效果，并扩大基质DHB检测多肽 与蛋白质的范围一’；选用聚四氟乙烯作为支撑物，同样也可以提高a一氰4一羟基肉桂酸(CHCA)和SA 检测蛋白质的范围¨01．目前，改善MALDI—MS技术分析混合多肽和蛋白质分辨率、提高灵敏度或信噪 比仍然是生物质谱研究领域中的热点课题之一【s，j． 本文选用人血清转铁蛋白、牛血清白蛋白、鲨鱼肝铁蛋白辅助基质提高激光解吸／电离多肽离子 化率和绝对强度，增强MALDI—MS检测多肽灵敏度和PMF技术鉴定蛋白质的可信度，这一研究具有重 要意义和科学价值． 收稿日期：2006-04-24． 基金项目：国家自然科学基金(批准号30470372)和福建省自然科学基金(批准号：(3031006)资助． 890 高等学校化学学报 V01．28 1 实验部分 1．1仪器与试剂 Reflex