实验14理化因素对微生物生长的影响 [恢复].pptVIP

实验十三 化学因素对微生物的影响 实验目的 1．了解常用化学药品对微生物的作用。 2．学习测定石炭酸系数的方法。 基本原理 　　常用的化学消毒剂主要有重金属及其盐类，酚、醇、醛等有机化合物以及碘、表面活性剂等。它们的杀菌或抑菌作用主要是使菌体蛋白质变性，或者与酶的—SH基结合而使酶失去活性所致。 　　为了比较各种化学消毒剂的杀菌能力，常以石炭酸为标准，即将某一消毒剂作不同稀释后，在一定条件下，一定时间内致死全部供试微生物的最高稀释浓度，与达到同样效果的石炭酸的最高稀释度的比值，称为这种消毒剂对该种微生物的石炭酸系数（酚系数）。石炭酸系数越大，说明该消毒剂杀菌能力越强。 各种化学药品的杀菌作用 以滤纸圆片浸沾一定稀释度的药物，贴附于含菌平板培养基上，孵育后，因药物的抑菌作用及渗透性，纸片周围可以有抑菌圈出现，据根抑菌圈的有无和大小，以测知该菌对这些药物的敏感性。 实验材料 　菌种: 大肠杆菌； 培养基: 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 试剂: 2．5％碘酒，0．1％升汞（HgCl2），5％石炭酸，75％酒精，0．25％次氯酸钠 ， 0．005％龙胆紫，0．05％龙胆紫； 其他:　　培养皿，滤纸片，试管，吸管等。 实验方法 1．将大肠杆菌制成含菌平板。 2．每一种细菌的琼脂平板上，分别放置相应浓度的碘酒，升汞（HgCl2），石炭酸，酒精，次氯酸钠，龙胆紫的药物滤纸圆片，各片间距要相等。 平板纸片法示意图 0.005%龙胆紫 0.1%升汞 2.5%碘酒 0.25％次氯酸钠 5%石炭酸 石炭酸系数的测定 将5％（1：20）的石炭酸液按表Ⅸ-1配成不同浓度，每管5ml。 （2）将待测药物（苯酚）先配成1：20的原液，再按表Ⅸ-2配成不同浓度，每管 5ml。 （3）取肉膏蛋白胨液体培养基30管，1—15管标明石炭酸的5种浓度，每种浓度3管，每3管分5、10、15分钟处理，16—30管标明来苏尔的5种浓度，同样每种浓度3管，每3管分5、10、15分钟处理。 　　 （4）在上述不同浓度的石炭酸和苯酚溶液中，各接入0．5ml大肠杆菌液，摇匀。注意每管自接种时起在5、10、15分钟，用同一接种环从各管内取一环接入上述已标记的液体培养基试管中。 石炭酸系数的测定 石炭酸系数的测定 来苏尔的配制 （5）置37℃温室中培养 48小时，观察并记录生长情况。生长者溶液混浊，以“+”表示；不生长者溶液澄清，以“-”表示。 　　（6）计算系数值 找出在5分钟生长，而在10分钟和15分钟均不生长的石炭酸及来苏尔的最大稀释度，计算二者的比值。例如石炭酸在10分钟内杀死大肠杆菌的最大稀释度是1：70，来苏尔是1：250，则来苏尔的石炭酸系数为250/70=3．6。 石炭酸系数的测定 实验报告 　　1、结果 （1）各种化学药品对大肠杆菌的致死能力 苯酚 次氯酸钠 (2)石炭酸系数的测定和计算 苯酚 2．思考题 来苏尔对大肠杆菌的石炭酸系数是多少？ 化学药剂对微生物所形成的抑菌圈未长菌部分是否说明微生物细胞已被杀死？ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *