壳聚糖的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析.pdfVIP

研究简报 第35卷 分析化学(FENⅪHuAxuE) 第7期 of 2007年7月 ChineseJounlal Chemistry 1025—1028 Analytical 壳聚糖的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析 赵镇文1 熊蕾2 王振鹏1 辛斌1 胡伟华1 熊少祥“ 1(中国科学院化学研究所分子科学中心北京质谱中心，北京100080) 2(中国科学技术大学化学系，合肥230026) 摘要利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI．10F．Ms)分析甲壳素脱乙酰化降解产物——壳 聚糖，对基质、制样方法等影响MALDI．TOF．Ms测定结果的因素进行了研究。实验发现，以2，5．二羟基苯甲 酸(DHB)为基质，二次结晶法制样分析壳聚糖，既获得了壳聚糖的分子量信息，又可以推断壳聚糖的脱乙酰 度，对壳聚糖的制备及其质量与性能控制有着十分重要的指导意义。 关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，壳聚糖，二次结晶法 1 引 言 壳聚糖是甲壳素的脱乙酰化降解产物…，具有抗菌、降胆固醇、降血脂、增强免疫作用及抗肿瘤活 性等多种生物活性用途。研究表明：不同分子量的壳聚糖性质差异很大，有时甚至表现出截然相反的特 性心J，壳聚糖的许多独特功能只有在分子量降低到一定程度时才表现出来。另外，壳聚糖随脱乙酰度 不同，其性能也有很大不同。壳聚糖良好的生物相容性主要由氨基提供[3]，分子链上存在足够数量的 氨基也是对其进一步改性的前提。因此，选择适当的方法对壳聚糖进行降解，测定降解产物的分子量及 脱乙酰度就显得尤为重要。 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI—TOF．MS)是近年来发展起来的一种“软电离”质谱技 术”J，有着极高的质量上限，直观准确、灵敏快捷等优点。本研究利用MALDI—TOF—Ms分析壳聚糖，很 好地测定了壳聚糖分子量，推算了脱乙酰度，实验结果表明，MALDI—TOF．Ms数据对壳聚糖的制备及其 质量与性能控制有着十分重要的指导意义。 2实验部分 2．1仪器与试剂 BIFLEX III型M鑫LDI—TOF质谱仪(Bruker公司)；氮激光器，波长337nm，采用离子延迟引出 (delayed 准样品(B11lker公司)。 2．2实验方法 中配制成100 g／L的储备液，壳聚糖样品(中国科学院理化所)也溶于此溶剂中配制成50∥L的储备液， 用时稀释至所需浓度。 吸取1斗L的基质溶液和1斗L的样品溶液，充分混匀，吸取0．5¨L的混合液滴于干净的不锈钢样 品靶上，待溶剂自然挥发样品结晶后，再滴加0．5灿的乙醇，使样品与基质形成的混晶二次结晶，乙醇 挥发后即制得待测分析样品，进行质谱分析。 3结果与讨论 3．1基质的选择 2006旬8一19收稿；200r7_02．12接受 本文系国家自然科学基金(No．200350lO资助项目 ·E‘mail：mscbj@icc拍．卵．cn 1026 分析化学 第35卷 sA、DHB3种常用基质测定壳聚糖分子量，得到质谱图。实验发现，用cHCA和DHB做基质时都得到 了较好的信噪比；而用SA做基质时得到的信号很弱。选用DHB做基质时，发现基质本身峰少，对样品 检测干扰小。而用CHCA、SA做基质时，都不同程度的出现了基质峰，SA的基质干扰峰最为明显。从 3种基质的谱图中选择一组质量数相同的分子离子峰，比较它们的分辨率，发现DHB的分辨率最好，其 次是SA，而CHCA的分辨率最差。用DHB做基质得到的峰的强度明显高于其它两种基质，并且对分子 量的检测范围也好于其它基质。以上现象说明DHB对壳聚糖有很好的辅助解吸电离作用。 3．2制样方法对测定结果的影响 分别用浓度不同的DHB做基质测定壳聚糖。实验发现，当基质浓度小于10g／L时或者大于 100 g／L时，需要多次尝试才能勉强出峰，得