苦参碱对慢性萎缩性胃炎大鼠PCNA及Bax、Bcl-2含量的影响.docVIP

精品论文 参考文献 苦参碱对慢性萎缩性胃炎大鼠PCNA及Bax、Bcl-2含量的影响 乔 虹 娄 华* 　　（郑州市中医院 河南 郑州 450007） 　　【摘 要】目的：探讨苦参碱对慢性萎缩性胃炎大鼠（CAG）PCNA及Bcl-2、Bax的影响及机制。方法：将健康Wistar大鼠随机分为4组，即正常组、CAG组、苦参碱组、叶酸组，每组12只。正常组自由饮食，同时以模型组等量自来水灌胃。用40%乙醇与2%水杨酸钠交替灌胃联合自由饮用去氧胆酸钠法建立大鼠CAG模型。造模成功后开始给予药物干预，叶酸组给予叶酸40mg /（kg . d)灌胃，苦参碱组给予苦参碱180 mg / (kg.d)灌胃，正常组和模型组给予等量自来水灌胃，1次/d，共50 d。取材后ELISA法检测胃组织中PCNA的表达,免疫组化法检测胃粘膜中Bcl-2和Bax的表达变化。结果：与正常组比较，CAG组PCNA、Bcl-2表达显著升高（Plt;0.05)，胃粘膜Bax表达显著降低(P lt; 0. 01)；与CAG组比较，苦参碱组PCNA、Bcl-2表达下降，Bax表达升高(Plt;0.01或Plt;0.05)，叶酸组的无统计学差异(P gt; 0. 05)。结论：苦参碱可通过下调PCNA、Bcl-2表达或上调Bax表达缓解胃粘膜炎性细胞浸润程度，对CAG大鼠模型有较好的治疗作用。 　　【关键词】苦参碱；慢性萎缩性胃炎；PCNA；Bax；Bcl-2 　　【中图分类号】R289 【文献标识码】A 【文章编号】1003-5028（2015）5-0030-02 　　慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis，CAG) 是一种退行性胃粘膜病变，以胃固有腺体的萎缩，肠上皮化生及炎性反应以及伴有胃粘膜上皮不典型增生为典型表现，同时可伴随免疫功能及分泌激素失调等。其发病率、癌变率较高，目前已成为极受医学界重视的疑难杂症。苦参碱是从苦豆子中提取的一种生物碱，研究表明，苦参碱具有免疫调节功能，能够降低增殖细胞核抗原(PCNA) [1]、 Bcl-2[2]的表达，增高Bax的表达。另研究显示，在慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃组织中，PCNA，Bcl-2表达增高，Bax表达降低。本研究从分子表达和病理变化的角度探讨了苦参碱对CAG模型大鼠PCNA、Bax和Bcl-2表达的影响，旨在为临床治疗提供理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 动 物 　　健康清洁级 Wistar 大鼠48只，雌雄各半，体重180-220g，河南中医学院动物实验??心提供。 　　1.2 实验药物 　　苦参碱（郑州市中医院药剂科，纯度98%），用蒸馏水稀释至180mg/kg。 　　1.3 试剂及仪器 　　试剂：乙醇（天津市百世化工有限公司）；水杨酸钠（天津市化学一厂）；叶酸（天津飞鹰制药有限公司）；Bax、Bcl-2（北京博奥森生物技术公司）；PCNA ELISA试剂盒（北京博奥森生物技术公司）；SP试剂盒（美国ZYMED公司）；DAB染色液（美国ZYMED公司）。 　　1.4 方 法 　　1.4.1 将48只健康Wistar大鼠随机分为4组，即正常组、CAG组、苦参碱组、叶酸组，每组12只。正常组自由饮食，同时以模型组等量自来水灌胃。除正常组外各组大鼠采用40%乙醇与2%水杨酸钠交替灌胃灌胃2个月，1次/d，灌胃前后1 h禁食禁水，并自由饮用去氧胆酸钠，2 d足量喂食，1 d停食；正常组给予1 mL/100 g体重生理盐水日1次灌胃，自由饮水进食，直至实验结束。造模过程中CAG组死亡2只，苦参碱组、叶酸组各死亡1只，正常组没有死亡。随机抽取2只大鼠做胃黏膜病理组织学检查，确认造模成功后进行药物干预实验，叶酸组给予叶酸40mg / （kg.d)灌胃，苦参碱组给予苦参碱180 mg /（kg.d)灌胃，正常组和模型组给予等量自来水灌胃，1次/d，共45 d。治疗期间模型组、叶酸组、正常组各CAG组予1 mL /100 g体重生理盐水1次/d灌胃。各组灌胃均50天后，处死所有大鼠。 　　1.4.2 ELISA法测定标本中PCNA含量：采用摘取眼球法取血，约5 mL/只，离心10 min，分离血浆、血清，-80℃保存，采用酶联免疫吸附法检测PCNA含量，具体操作方法详见试剂盒说明书。 　　1.4.3 免疫组织化学方法检测大鼠组织细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达：操作包括两部分：①剖胃取材后,用10％福尔马林固定，HE 染色做病理检查；按照常规脱水，石蜡包埋，4 um厚度连续切片；取切片拷至已用多聚赖氨酸防脱片处理的载玻片上，进行常规免疫组织化学染色（按SABC试剂盒说明书的步骤操作，每次实验以PBS代替一抗作阴性对照）。②在光镜下进行观察，每张切片至