荧光PCR检测MP-DNA在儿童肺炎中的应用.docVIP

精品论文 参考文献 荧光PCR检测MP-DNA在儿童肺炎中的应用 （内江市中医医院检验科 四川 内江 641000） 【摘要】 目的：研究荧光PCR检测MP-DNA在儿童肺炎诊断中临床应用价值。方法：选择132例儿童呼吸道感染患者，以0～4岁为试验组，其他年龄段患者为对照组，分别行荧光PCR检测咽拭子或深部浓痰中MP-DNA，被动凝集法检测患者血清中MP-Ab。结果： 试验组荧光PCR阳性率为20.3%、被动凝集法阳性率为8.5%；对照组荧光PCR阳性率为20.1%、被动凝集法阳性率为30.1%；经卡方检验，荧光PCR检测两组别chi;2=0.19，Pgt;0.05无统计学差异，被动凝集法检测两组别chi;2=10.7，Plt;0.05有统计学差异。结论：荧光PCR具有特异性强，灵敏度高的特点，尤其在婴幼儿的肺炎支原体检测中，考虑患者免疫系统发育未全因素，荧光PCR更具优势。 【关键词】 肺炎支原体（MP）；荧光PCR；被动凝集法； 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）36-0161-02 支原体肺炎多发于婴幼儿及儿童的呼吸道感染，潜伏期2～3周，临床症状较轻，表现为头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，难与其他细菌、病毒引起的肺炎鉴别，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，但多在秋冬时节。笔者回顾性分析了20014年7月至2015年6月我院儿科132例呼吸道感染患者临床资料，结果如下： 1.研究对象与方法 1.1 研究对象 132例患者均来自我院儿科门诊或住院病人，以年龄le;4岁为试验组共59例，其中男性27例，女性32例，平均年龄2.3岁；年龄＞4岁为对照组共73例，其中男性33例，女性40例，平均年龄8.1岁。 1.2 方法 1.2.1患者清晨使用一次性吸痰器取深部浓痰，或用咽拭子取咽峡部分泌物立即送检，做MP-DNA荧光PCR检测，扩增仪器为ABI7300，试剂由中山大学达安生物有限公司提供，反应循环条件：93℃ 2min；93℃ 45s，55℃ 60s,10个循环；93℃ 30s，55℃ 45s，30个循环。以扩增曲线呈S型，CT值lt;30为实验结果阳性。 1.2.2 同时抽取患者2ml静脉血注入干燥试管中，分离血清，被动凝集法检测MP-Ab（IgM/IgG）,试剂使用日本富士瑞必欧株式会社试剂盒，???敏粒子与患者血清中MP-Ab可发生凝集反应，以实验中出现凝集现象为阳性。 1.3 统计学处理 使用统计学软件SPSS14.0进行数据分析处理，两组率的比较采用卡方检验。 2.结果 两组别荧光PCR与被动凝集法的阳性率见下表： 荧光PCR检测试验组与对照组经卡方检验chi;2=0.19，P=0.67（Pgt;0.05）无统计学意义；被动凝集法试验组与对照组经卡方检验chi;2=10.7，P=0.001（Plt;0.05）有统计学差异。 3.分析 肺炎支原体是引起婴幼儿及儿童肺炎的主要病原体，检测方法主要是分离培养、血清学检测，分离培养是病原学的金标准但要求条件比较严格，一般基层医院难以满足，且时间较长，需要10～14天[1]，临床应用比较少。血清学检测比较方便，局限性表现为假阳性及假阴性偏高[2]，近年随着分子诊断的普及，荧光PCR逐渐在MP的早期诊断中呈现出优势，荧光PCR与常规PCR比较，最大优势在于加入了荧光标记探针，避免了非特异性扩增造成的假阳性信号，特异性强，灵敏度高。 从实验数据可得，试验组与对照组，荧光PCR检测无统计学差异，肺炎支原体在0～4岁婴幼儿及4岁以上儿童感染率相近，被动凝集法在两组别中的检出率有统计学差异，被动凝集法属于血清学实验，主要检测MP-IgM和MP-IgG，MP-IgM属于出现较早的抗体，在感染7天左右达到检出限，10-20天高峰，持续12～16周[3]，在0～4岁组婴幼儿免疫系统尚在发育成熟阶段，MP-Ab产生比较微量或无，表现为被动凝集法检测阳性率过低，荧光PCR直接检测病原体DNA，两组检出率无差异。有研究报道荧光PCR检出率与被动凝集法检出率符合率低[4]，笔者从临床检测观察与上述观点相同，被动凝集法MP-Ab的窗口期在7天左右，荧光PCR直接测病原体不存在此现象，早期诊断荧光PCR有优势，荧光PCR检测标本为咽拭子或痰液，标本的取样存在随机性，病原体分布不均，对检出率有一定的影响，另痰液中的黏蛋白去除是否