荧光定量PCR法测定HBV DNA室内质量控制的回顾性分析.docVIP

精品论文 参考文献 荧光定量PCR法测定HBV DNA室内质量控制的回顾性分析 延海深 (黑龙江省绥滨农场职工医院检验科 156203) 【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2010)19-0049-02 【关键词】 荧光定量 HBV DNA 质量控制 乙型肝炎病毒（HBV）DNA的定量测定在乙型肝炎病人的临床治疗监测中有重要的参考价值，主要用于乙型肝炎病人治疗的动态观察及疗效判断。这就要求定量测定要有很好的重复性和准确性，衡量检测结果是否可信的直接依据就是HBV DNA室内质量控制，因此，针对同一批次质控血清，连续监测一年多的结果进行回顾性分析总结，以期提高其检测质量，为临术治疗和观察提供可靠的依据。结果如下： 1 材料和方法 1.1 数据 来自哈尔滨医科大学第一临床医院分子生物室共14个月，HBV DNA室内质量控制检测数据，共268份。 1.1.1 仪器 PE7300全自动荧光定量PCR扩增系统。 1.1.2 试剂 深圳匹基生物科技公司乙型肝炎核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒，临界阳性血清，强阳性血清，阴性血清。 2 方法 质控品的准备：自制质控品的制备方法：收集试剂盒所带的临界阳性血清，强阳性血清，阴性血清，累积到一定数量(够使用六个月以上～一年)，混匀。将混匀的质控血清按0．2～0．5毫升／支分装，封口，标识。少量置-20℃保存，常规测定使用，其余置-70℃长期冻存。 2.1 求自制质控品的测定值 在上批购买质控品未使用尽，拟更换质控品批号时，提前一个月开始下一批号质控品靶值和标准差的测定。每个工作日连续常规检测20次以上，同时测定的室内质控品应在控，以获得RCV数据。 2.2 采用Levey-Jerming质控图法 2.3 质控规则的选择 以Xplusmn;2SD警告线，Xplusmn;3SD为失控线。 连续7个质控点落在均值之一侧 3 结果 3.1 自制质控品的靶值即均值 X=5.61，标准差：SD=0.25，变异系数4.4％，测定结果见表1。 。 其中质控点落在xplusmn;3S之外，共有13次；连续7个质控点落在均值之一测，有4次；还有一种情况，虽然没有脱靶，但室内质控测??值超过Xplusmn;2S，处于告警状态，在这种情况下，应关注质控检测结果是否有趋势性变化，但不影响结果的发出。 质控点落在xplusmn;3S之外时，首先采取的措施是复检，复检的目的主要是用于查明人为误差，也可以查出偶然误差，如果是偶然误差，重测的结果应在允许范围内。同时还在观察标准曲线的生成情况，扩增效率的高低，曲线梯并是否良好，曲线形态是否标准，Ct值是否有飘移，还要结合临床标本的检测结果，是否有高值和低值，来区分是试剂造成的失控还是操作不当或仪器故障或老化造成的失控。若临床标本测定结果的曲线标准，测量值有高有低，同时检测的试剂空白及阴性质控均在控，很有可能是标准品质量有问题，如降解、更换试剂型号等情况发生造成的。本次统计中，2006年8月共有5次失控，是由于更换试剂有一定的影响，对新试剂、新方法操作不太适应。 对于，连续7个质控点落在均值之一侧，若均未超出Xplusmn;3s范围时，认为存在系统误差，但检测结果仍可发出；若连续7个质控点落在均值之一侧，而且质控数据有超出Xplusmn;3s范围的趋势时(逐渐升高或逐渐降低)，一定要联络仪器工程师，及时校准仪器。 对于质控规则的选择，我选择了两条，若单一选择Xplusmn;2SD或Xplusmn;3SD范围时，有的失控监测不到，选择连续7个质控点落在均值之一测，就是为了弥补单一选择的不足。过多的质控规则，又使失控限定的太严，使太多的结果甚至合格的结果判为失控。 参 考 文 献 [1]叶应妩 王毓三.全国临床检验操作规程.南京:东南大学出版社,1997. [2]郑怀竞.室问质评与室内质控.北京:北京医科大学、北京协和医科大学联合出版社,1997. [3]武建国 顾可梁 等.医学实验诊断学进展.南京:东南大学出版社,2000.