荧光定量PCR检测HBV—DNA与乙肝五项检测结果的相关性探讨.docVIP

精品论文 参考文献 荧光定量PCR检测HBV—DNA与乙肝五项检测结果的相关性探讨 朴学哲 任冬娟 孙超 (黑龙江省森工总医院检验科　150040） 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2010）27-0392-01 乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，世界卫生组织(WHO)估计，本病每年造成100万人死亡，慢性乙型肝炎是HBV感染的一种严重后果。HBV-DNA是直接反映乙肝病毒存在，活动性复制及具有传染性的可靠指标。但目前我国现状HBV感染者多以其血清感染标志物(乙肝五项，HBV-M)判定，由于其组合模式复杂多样，从而导致了临床上对部分发病患者的HBV感染复制状况难以判断，有时甚至会出现漏诊的情况。定量PCR法的应用，使得我们进行HBV-DNA的检测的同时得以对其进行相对的量化，这对于乙肝患者体内的HBV的复制以及传染性有更直接的了解，同时也更有利于对临床HBV感染的诊断、治疗方案的选择及疗效的判断。本文采用荧光定量RCR(FQ-PCR)对307例疑假装乙肝患者标本血清的不同HBV血清学标志物组合进行了HBV-DNA检测，闭幕式对结果进行了统计学处理，以探讨 HBV-M与HBV-DNA复制水平的关系，现报告如下： 1　资料与方法 1.1 标本来源 均系2007年7月至2009年8月到我院就诊的所有同时做过乙肝五项及HBV-DNA检测的疑似乙肝的门诊和住院患者，共307例，其中女129人，男178人，年龄17～78岁，平均39岁。 1.2 检测仪器 1.2.1 LightCycler定量扩增仪(德国)。 1.2.2 Alisei全自动酶标仪(德国)。 1.3 检测方法和试剂 1.3.1 HBV-M检测 用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测，试剂由上海科华生物技术有限公司，并严格按说明书操作。 1.3.2 HBV-DNA定量分析 采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测，试剂由上海复星医学科技发展有限公司提供，严格按说明书的步骤进行操作。 1.4 统计学处理 根据HBV血清标志物分为8组，将各组的HBV-DNA拷贝数进行对数变换，以指数表示(plusmn;S)，定量测量范围仍用实际检测值表示；采用X2检验进行组间HBV-DNA阳性率显著性检验，采用两样本均数的t检验比较拷贝数。 2　结果 HBV-DNA定量测定结果 307例疑似乙肝患者者血清标本中，106例HBV-DNA阳性，201例阴性，阳性最低拷贝数为1.30E+03copy/ml，最高拷贝数为7.70E+09copy/ml。 注：*与大三阳组比较Plt;0.01，#与大三阳比较Plt;0.05 3　讨论 PQ-PCR是进行临床基因诊断的有效手段，它采用了完全闭管检测，不需要PCR后处理，避免了交叉感染；同时采用实时检测技术，所得Ct值和原始模板数量完全呈线形相关，定量准确率极高，它不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱的高清确性，克服了常规PCR的许多缺点。 ELISA法检测乙肝五项是临床HBV感染的传统手段，它检测的是人体对HBV的免疫反应状态，而 FQ-PCR则可以准确的反应出HBV-DNA复制水平、病程变化和治疗恢复情况等。本文结果显示，54例大三阳组中，其HBV-DNA阳性53例，检出率达98.15%，而且呈较高的拷贝量，经统计学处理大三阳组和HBsAg(+)HBcAb(+)组与小三阳组有显著性差异，说明这些患者HBV具有较高的复制水平，是具有传染性的重要标志。 54例小三阳血清中15例检出HBV-DNA阳性，检出率为27.78%，平均拷贝数达到3.79E+05拷贝数和阳性率均低于大三阳组，但仍然具有较强的传染性，说明HBeAb的存在并不表示患者体内没有病毒复制，与既往文献报道结果吻合。 在34例HBsAg(+)HBcAb(+)血清中，有3l例检出HBV-DNA最性，检出率为91.18%，平均拷贝数为2.85E+05/ml，提示该组中的病人仍具有罗强的病毒复制，传染性强，此情况可能为血清转换期或前C区突变，如果经过动态观察，仍表现HBsAg(+)HBcAb(+)及HBV-DNA阳性，可能为前C区突变。 在63例HBs