郜刚分子生物学-06-DNA端粒的复制.pptVIP

线性染色体端粒DNA的复制 线性DNA复制后的问题 线性DNA复制后在其新生链的5’端总是留下一段空隙，即缩短 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 两条模板链 各自复制 引物切除 留下空隙 引物 新生链 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 对于线性DNA来讲，复制时，由于受DNA聚合酶特性限制，子代DNA链的最后一个片断去除引物后，无法填补空隙，易造成子代DNA链的缩短。 染色体末端缩短 对于染色体来讲，由于RNA引物的原因，DNA聚合酶一定会留下染色体末端的一段DNA（即一段端粒）使其不被复制。那么真核细胞染色体末端的端粒就会随着细胞分裂而缩短。这个缩短的端粒传给子细胞后，随着细胞的再次分裂进一步缩短。 端粒 位于真核生物染色体末端（一条链的3?-OH），由蛋白质和DNA（人类：“TTAGGG”重复序列）紧密结合的保护染色体末端的结构。 端粒功能： 避免染色体DNA链的缩短；防止染色体的融合或降解；维持染色体结构的稳定性和完整性。 端粒的生物学意义 （1）维持染色体结构的完整性，防止染色体被核酸酶降解及染色体间相互融和。 （2）防止染色体结构基因在复制时丢失，解决了末端复制的难题。 DNA复制时，DNA聚合酶必须在RNA引物基础上从5′向3′方向延伸，而5′端RNA引物去除后因无引物的存在而不能复制，结果每复制一次染色体末端将丢失一段序列。端粒的存在使每次丢失的仅为端粒的一部分，从而保护了染色体内部的结构基因。另外，有些研究还显示，端粒与核运动有关，可能对同源染色体的配对重组有重要意义。 。 染色体末端端粒随着每次细胞分裂逐渐缩短，直到不能分裂走向衰老。这就是人类细胞衰老的原因之一。但是人类的种系细胞一生中都能维持分裂、不断增殖。其原因在于：该细胞表达端粒酶。 端粒酶以自身一段RNA为模板，通过逆转录酶，转录出一段端粒片段并使之连接于染色体的端粒末端，使端粒不缩短，维持完整，从而保持了细胞的永生化生长。 在单细胞生物、多细胞生物的种系细胞中都显示出弱的端粒酶活性。而在人类正常体细胞均无端粒酶活性。值得注意的是，在绝大多数恶性肿瘤细胞中显示明显的端粒酶活性，这可能是肿瘤细胞具有永生性生长的原因之一。 端粒酶的爬行模型（动画演示） 母链藉非标准碱基配对回折 DNA聚合酶 端粒合成完成 进一步加工 如上图所示, (a)端粒酶以其RNA为模板, 通过逆转录作用, 催化富含G链的延伸; (b)端粒酶向端粒新3′端移动,继续以其RNA为模板, 催化富含G的DNA母链延长; (c)端粒酶反复移位, 通过逆转录反应使端粒富含G链增长到足够长度; (d)富含C链的空缺部分不需要引物酶合成引物提供3′-OH, 而是富含G的链突出的寡脱氧核苷酸d(GGGGTTTTGGGG)通过非Watson-Crick配对方式自身的GGGG之间按G · G配对, 回折形成发卡并提供3′-OH; (e)由发卡引发富含C链在3′-OH以富含G链为模板, 由DNA聚合酶添加新的dNTP, 进一步延伸填补空缺, 间隙最后由DNA连接酶封口; (f)端粒DNA与端粒蛋白结合, 完成加工后, 形成完整的端粒。 如上图所示, (a)端粒酶以其RNA为模板, 使用右边的AAC与新掺入的TTG配对, 催化富含G链的延伸; (b) 端粒酶向端粒新3′端移动, 此时模板RNA左边的AAC与3′端新掺入的TTG配对; (c) 端粒酶在模板RNA指导下将6个一组GGGTGG添加到端粒G链3′端, 重复(a) ～(c)反应使端粒富含G链增长; (d) 富含G链充分延伸, 而空缺的富含C链部分由引物酶合成引物RNA, 其序列互补于富含G链3′端; (e) 在新合成引物引发下, DNA聚合酶合成DNA用以填补端粒富含C链的缺口; (f) 引物被切除后, 对应的富含G链突出10～16个核苷酸; (g) 这种带重复序列的端粒DNA与端粒蛋白结合后, 通过G·G配对自身回折在染色体末端形成套索结构(t环, telomere loop)。 附加：反转录作用（RNA指导的DNA合成） 定义: 以RNA为模板, 按照RNA中的核苷酸顺序 合成DNA的过程称为反转录(reverse transcription, RT)。该过程由反转录酶催化进行。 1970年Temin和Baltimore同时分别从(鸡)劳氏肉 瘤病毒和小白鼠白血病病毒等致病RNA病毒中分 离出反转录酶，迄今已知的致癌RNA病毒都含有 反转录酶。 * * We do not know how the complementary