聚丙烯酰胺凝胶电泳前活性染料与蛋白质共价染色的条件探索-分析化学.PDFVIP

38 (FENXI HUAXUE) 10 第 卷 分析化学 研究报告 第 期 2010 10 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1423 ～ 1427 年 月 DOI :10． 3724 / SP． J． 1096． 2010． 01423 聚丙烯酰胺凝胶电泳前活性染料与蛋白质共价染色的条件探索 1 2 1 * 1 戴彬 吉坤美 张同艳 彭孝军 1 ( ， 116012) 2 ( ， 518960) 大连理工大学精细化工国家重点实验室 大连 深圳大学医学院 深圳 ， 。 摘 要 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳前染色法 考察了多种类型活性染料与牛血清白蛋白共价染色的条件 实 ， KN-R ， :pH 10 ． 0 ，60 ℃ ，50 min ， 200 ng ， 验发现 活性蓝 型标记效果最佳 其优化标记条件为 蛋白检出限达 重 ， ， 。 复性和测试范围内的定量性较好 可在电泳时直接实时观测 作为蛋白标示剂有一定的应用前景 ; ; 关键词 聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白染色 活性染料 1 引 言 (PAGE) ［1］， ， 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 法对蛋白质等样品进行分离 一般需要对分离样品进行染色 ， ( ) 以检验分离效果 这主要是利用染料和生物大分子 如蛋白质等 结合生成有色的复合物来实现检测的 。 ， 。 目的 目前 比较常见的染色方法有后染色法和前染色法 后染色法是在电泳之后进行蛋白质染色的 ［2］ ， 。 方法 考马斯亮蓝染色和银染法就是最为常见的两种蛋白电泳后染色法 人们尝试用荧光染料对凝 ［3 ，4］ ， UV ， 胶中的蛋白质条带进行染色 但这种方法需要在 瞬变显示器或紫外灯下观测 不能实时观察分 。 ， 。 ， ， 离过程 后染色法需要在电泳之后再进行一步染色操作 耗时 前染色法 即预染色法 是在电泳前对 。 ， 。 蛋白质染色的一种方法 前染色法操作简单方便 而且可在电泳同时实时观察蛋白质的电泳分离带 ， 。 本研究比较了几