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二、胚状体 1、胚状体的概念 离体培养条件下胚状体起源于一个非合子细胞，它经历 胚胎发育过程所形成的类胚结构。 ●胚状体是离体培养的产物，仅限于离体培养范畴内使 用，区别于无融合生殖的胚。 ● 胚状体起源于非合子细胞，区别于合子胚； ● 胚状体的形成经历与合子胚相似的发育过程， 从球 形胚、心 形胚、鱼雷胚到成熟胚，它区别于离体培养时 分化的芽体。 2、胚状体的类别 ● 体细胞胚： 来源于根、茎、叶以及它们的组织和细胞，经离体培养而发生的类胚结构。其染色体组为两套，可发育成正常可育的植物体。 ●三倍体胚： 来源于胚乳细胞的胚状体，具有三套染色体组。如巴豆、蓖麻、桃等。三倍体植物具有不育性。 ●生殖细胞胚： 来源于大孢子和小孢子细胞（来源于小孢子的又称花 粉胚），经离体培养而形成的类胚结构。染色体为单 套，可发育成单倍体植株，经染色体加倍后才能形成可 育的植物体。 (3) 胚状体的特点 ●两极性：胚状体在其发育的最早阶段就具有根端(胚根)和茎端。 ●胚状体与培养的供体外植体的维管组织无直接联系。 石龙芮下胚轴胚状体的发生 A、培养一个月的幼苗，下胚轴上产生许多胚状体；B、下胚轴部分放大；C、两个表皮细胞；D～G 原胚发生过程；J、心形胚状体；H、I 已分化子叶、胚根及原维管束的胚状体。 胡萝卜胚状体与合子胚发生过程的比较 A、合子胚；B、胚状体 §2～3 培养基组成对细胞全能性表达的影响 一、培养基的营养组成 （一）无机盐混合物: 1、大量元素: N、P、K、Ca、Mg、S ①硝酸盐: KNO3、NH4NO3、NaNO3、Ca(NO3)2 其中钾盐不低于25 mmol/L 。 ②铵盐: NH4NO3、NH4H2P04、(NH4)2S04 ③ Ca、Mg、S 离子浓度约在1～3 mmol/L 之间。 ●其中铵盐量不超过8 mmol/L。 但单细胞培养 对氮源的要求相对较高，二者量可上升到60 mmol/L ；无机氮素(硝态氮和铵态氮)浓度过 高时，对细胞分裂很不利，二者比例是应用中值 得特别重视的问题。 2、微量元素： Fe、Mn、Cu、Zn、B、Mo、Cl、Co、I （在土壤和有机体中含量仅“几/10万～几/万”） 3、无机盐混合物的作用： ●供给培养细胞无机营养； ●维持培养基的酸碱度：通过影响蛋白质的等 电点，使蛋白质破坏（过高或过低）； ●维持培养基的渗透压。 （二）有机物类 1、 碳水化合物是培养细胞的碳源和能源 蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖 （总：10 ～ 150 g/L ）； 2、维生素类 ①盐酸硫胺素(VB1)：阻止愈伤组织就会褐变死亡。常用量 为0.4～1 mg/L 。 ②盐酸吡哆素(VB6)、促进根的生长，常用量为0.5mg/L。 ③烟酸(Vpp)：促进植物代谢和胚胎发育， 常用量为 0.5mg/L。 ④抗坏血酸(VC)：具有防止组织褐变，抵制多酚类物质作用。 ⑤肌醇(Myo-inositol):促进细胞壁的形成，愈伤组织的增殖。一般为100mg/L。 ⑥ 叶酸(VBc)：参与核酸合成。 ⑦生物素(VH)：羧化酶的辅基，与糖、脂肪、蛋白质和核酸代谢有关 。 在胚胎发生中，多种氨基酸混合使用，会起到更好的 促进作用。常用的有：甘氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨 酸、谷氨酰胺、天冬酰胺等。其中甘氨酸是基本培养基 中重要的成分。 （三）氨基酸和酰胺类物质 （四）植物激素类 1、类型： 1）生长素类: IAA、NAA 2,4-D、IBA等； 2）细胞分裂素: KT (动力精)、6-BA(BAP)、(ZT)、2ip（戊烯基腺嘌呤）； 3）赤霉素:双萜类60余种，常用赤霉酸(GA3)； 4）脱落酸(ABA)。 2、生物“活性”: ◆生长素活性: 24-D ＞NAA ＞ IAA ◆细胞分裂素的活性: ZT ＞ BA ＞ KT ＞腺嘌呤。ZT的活性比KT高 10倍，KT的活性比腺嘌呤大3万倍。 （五）天然复合物类 1、水解蛋白类:水解酪蛋白(酪朊素的水解物)，水解乳蛋白(乳蛋白的水解物)等。 2、酿酒副产品:酵母提取物、麦芽。 3、胚乳液:椰子乳汁、玉米胚乳和其他禾本科、乳熟期的胚乳汁。 4、果汁:番茄汁、马铃薯汁、香蕉汁、橘子汁、李子汁、葡萄汁。 ●天然复合物对启动植物细胞脱分化和再分化是有效的。但不同植物种适宜的天然复合物种类是不同的。 植 物 细 胞 工 程 plant cell engineering 植物细胞的构造 第一章：绪论 第二章：第二章 植物细胞的全能性及