沙门菌检验技术和方法PPT.pptVIP

沙门菌检验;沙门菌概况;虽然沙门菌的血清型很多，但多数国家从人体、动物和食品中分离出沙门菌仅约40~50个血清型。而在一个国家中的一定时期只约有10个血清型是比较常见的。 分类： 伤寒沙门菌(伤寒、副伤寒)-传染病防治法中规定报告的乙类传染病。 非伤寒沙门菌-食品卫生标准的检测的主要对象。 ;沙门菌的生物学特性;营养需求不高，需氧或兼性厌氧。普通营养培养基上均能生长，能够利用柠檬酸盐作为碳源。 在普通肠道选择性平板上基本上形成无色菌落。菌落中等大小，半透明，表面光滑，边缘整齐或呈锯齿状。 不分解乳糖，大部分菌株产H2S，发酵葡萄糖产酸不产气。 ;修订内容;生化鉴定： 1.采纳API 20E或Vitek GNI为传统生化鉴定方法的选择性替代方法。 2.生化鉴定项目进行调整： 原国标中生化鉴定是将可疑菌落同时接种于三糖铁（TSI）琼脂、蛋白胨水 (供做靛基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基； 现修改为：在接种TSI琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时增加一项营养琼脂（NA），经TSI琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的选择后，可筛掉大部分非沙门氏菌株，大大减少了工作量，同时也满足了API 20E或 Vitek GNI鉴定的需要。;为保持与原标准的一致性，新标准也保留了可以同时直接接种蛋白胨水 (供做靛基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、KCN 培养基的内容。本部分还增加了对疑似菌落进行留样确认的部分，以备必要时复查，这对生化鉴定不确定的菌落进行进一步验证是非常必要的。 血清学鉴定中的菌体分群改为选择性试验项目。 报告：综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报告25g样品中检出或未检出沙门菌。;培养基的改变;沙门菌的检验程序;沙门菌的检验程序;称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。 如为冷冻产品,应在45 ℃以下不超过15 min,或2 ℃～5 ℃不超过18 h解冻。 ;轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种于10 mL TTB 内, 于42 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。同时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。于36 ℃±1 ℃分别培养18 h～24 h (XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落。;沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 ;接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水 (供做靛基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h, 必要时可延长至48 h。 将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室温至少保留24 h，以备必要时复查。 ;生化试验 ;沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果 ;沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 ;沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 ;沙门氏菌属各生化群的鉴别必要时按此表进行沙门菌生化群鉴定 ;沙门菌的增菌培养基;沙门菌的增菌液;沙门菌的分离培养基;沙门菌的菌落形态：产H2S的菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色。菌落周围培养基可呈黑色或棕色，有些不产H2S的菌落，形成灰绿的菌落，周围培养基不变。 注：此培养基在制作过程中过分加热可使培养基的选择性降低，与TTB或SC合用可获得更高的检出率。 ;沙门菌的分离培养基;沙门菌的分离培养基;分离培养中的注意要点;BS琼脂：某些非典型菌株产生绿色菌落，其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平板培养24±2小时后，没有出现典型菌落，则不挑取任何菌落，让平板继续培养24±2小时。如果经48±2小时培养后，仍没有典型或可疑的菌落出现，则挑取2个或更多个非典型的菌落。 ;沙门菌显色培养基;可疑菌落的生化鉴定;沙门菌在TSI琼脂上的反应;赖氨酸脱羧酶试验;靛基质试验;尿素酶试验;氰化钾试验;沙门菌生化鉴定培养基- β-半乳糖苷酶(ONPG)试验;沙门菌生化鉴定的主要试验项目;沙门菌在API 20E的典型反应;应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测 试