实验室技术资料 2.docVIP

　13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液 　　【配制方法】 　　在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节　溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。 　　【注意】 　　EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。 　　14．溴化乙锭（10mg/ml溶液） 　　【配制方法】 　　在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 　　【注意】 　　小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。 　　15．2×HEPES缓冲盐溶液 　　【配制方法】 　　用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节　pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。 　　16．IPTG溶液 　　【配制方法】 　　IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 　　17．1mol/L乙酸镁溶液 　　【配制方法】 　　在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。 　　18．1mol/L MgCl2溶液 　　【配制方法】 　　在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。 　　【注意】 　　MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。 　　19．β-巯基乙醇（BME）溶液 　　【配制方法】 　　一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。 　　【注意】 　　BME或含有BME的溶液不能高压处理。 　　20．NBT溶液 　　【配制方法】 　　把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。 　　21．酚/氯仿溶液 　　【配制方法】 　　把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。 　　【注意】 　　酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 　　22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液 　　【配制方法】 　　用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。 　　【注意】 　　PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 　　PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节　为碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 　　23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液 　　【配制方法】 　　在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节　溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。 　　24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液 　　【配制方法】 　　将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节　pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。 　　25．乙酸钾溶液（用于碱裂解） 　　【配制方法】 　　在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。 　　26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液 　　【配制方法】 　　在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节　pH值至5.2或用稀乙酸调节　pH值至7.0，加水定容到1L，分装后