骨巨细胞瘤瘤细胞凋亡与临床复发的相关性研究.docVIP

精品论文 参考文献 骨巨细胞瘤瘤细胞凋亡与临床复发的相关性研究 庄庆1 黄磊1（通讯作者） 马秋野2 (1广州市第一人民医院口腔科 广东广州 510016；2 重庆市九龙坡区中医院 重庆 400039) 【摘要】 目的 了解骨巨细胞瘤瘤细胞凋亡指数与其生物学性质和复发的关系。方法 应用LCA免疫组化和TUNEL双重染色对有临床结果的48例骨巨细胞瘤标本进行组成成份的鉴定及其凋亡的检测。结果 ①棕色LCA阳性反应物质位于部份单核基质细胞和多核巨细胞膜上，蓝色的凋亡反应阳性物质位于多核巨细胞及LCA阴性和阳性单核基质细胞中。②治愈组和复发组LCA阴性单核基质细胞的百分比分别是9.70%和10.14%，两组统计学无明显差异。③治愈组和复发组LCA阴性单核基质细胞的凋亡率分别是3.94%和2.25%,统计学上差异显著（Plt;0.05）④Jaffe病理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级组中肿瘤细胞百分比，凋亡率均无显著性差异（P）0.05）。结论 骨巨细胞瘤中纤维细胞样单核基质细胞的凋亡率是影响其术后复发的因素之一。 【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）15-0063-02 骨巨细胞瘤是最常见的原发性骨肿瘤之一，其发生率占全部骨肿瘤的20%，中国人发生率是欧美的3倍。该仲瘤介于良恶性之间，但局部侵龚性强，主要表现为溶骨性病变，部分良性骨巨细胞瘤可发生远处转移，具有潜在恶性，常规手术治疗复发率高[1.2]。因此，本研究采用免疫组织化学方法和TUNEL技术对有临床结果的48例骨巨细胞瘤病理标本进行组成成份的鉴定及其调亡的检测。以探讨骨巨细胞瘤调亡指数与其复发的关系。 一、材料方法 1.资料 48例骨巨细胞瘤手术标本，其中胫骨上端19例，股骨下端16例，股骨上端6，肱骨上端7例，病人皆随访4年级上。其中治愈32例，复发16例，按Jaffe病理分级标准，I级17例。II级27例，III级4例。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，5um连续切片，贴于多聚赖氨酸处理的载玻片上，以备免疫组化和TUNEL染色。 2.试剂 鼠抗人白细胞共同抗原（LCA）单克隆抗体购自福州迈新生物试剂公司，产品编号：MAG-0037，1.5ml即用型。FITC标记DUTP原位细胞调亡检测试剂盒亦购自福州迈新生物试剂公司，产品编号：1684809。 3.方法 3.1 LCA免疫组化染色：采用Ultra SensitvieTM S-P法。按说明书方法染色，设空白对照及正常兔血清（1：50）替代一抗的替代对照。 3.2 LCA免疫组化及TUXEL双重染色：LCA免疫组化单染色同3.1，进行DAB显色反应，阳性反应为棕色。完成上述单染程序至DAB显色后，PBS冲洗（3times;3min），加入TUNEL反应液，检测系统为AP试剂盒，按说明书操作。显色剂为BCIP/NBT，阳性反应为蓝色。核快红复染，水性封片剂封片。 4.结果判定 4.1 LCA免疫组化单染结果判定：细胞膜呈现棕色者为LCA阳性，计算LCA阴性细胞百分数，作为骨巨细胞瘤肿瘤性细胞百分比。 4.2 LCA免疫组化及TUNEL双重染色结果判定：部分单核基质细胞及多核巨细胞是LCA胞膜阳性（染成棕色）：LCA胞膜阳性和阴性细胞中有部分细胞细胞核呈现蓝色者为凋亡阳性细胞，计算LCA胞膜阴性单核基本质细胞凋亡阳性百分率。作为骨巨细胞瘤的凋亡率，每分标本于40times;10视野下至少检测10个视野，每个视野计数100个细胞。 5.统计学分析 应用SPSS10.0统计学软件包，按治愈，复发分组及Jaffe病理分级分为I、II、III级组，求出每组各指标的均值plusmn;标准差，两组间均数比较用t检验，多组间用方差分析。 二、结果 棕色LCA阳性反应物质位于部分单核基质细胞和多核巨细胞的胞膜上，部分单核基细胞呈现阴性；蓝色的凋亡反应阳性物质位于多核巨细胞及LCA阳性和阴性单核基质细胞中。治愈组和复发组LCA阴性单核基质细胞的百分比分别是9.70%和10.14%,两组统计学无明显差异，两组LCA阴性单核基质细胞的凋亡率分别是3.94%和2.25%，统计学差异显著（Plt;0.05）见表1。Jaffe病理I、II、III级组中，肿瘤细胞百分比，凋亡率均无显著差异（Plt;0.05），见表2。