高效液相色谱快速检测８种合成着色剂的改进方法.docVIP

精品论文 参考文献 高效液相色谱快速检测８种合成着色剂的改进方法 卜庆尖　翟文娟　邓　新　任倩倩（青岛中一监测有限公司　山东　青岛　２６６０００） 　　【中图分类号】Ｒ２０７．３ 　【文献标识码】Ａ 　【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０７－０４１０－０１【摘要】建立了高效液相色谱法同时测定食品中８种合成着色剂（柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红）的方法。样品经乙醇．氨水．水溶液前处理，经ＺＯＲＢＡＸＳＢ．Ｃ１８（２５０ｍｍtimes;４．６ｍｍ，５mu;ｍ）色谱柱分离，以甲醇和０．０２ｍｏｌ／Ｌ的乙酸铵为流动相，进行梯度洗脱，用紫外检测器设定波长程序，分别在４５０ｎｍ、４９０ｎｍ、６００ｎｍ波长处检测，８种物质的线性相关系数大于０．９９９，方法检出限为０．０２６～０．０９０mu;ｇ／ｍＬ。８种合成着色剂的回收率范围在６３．４％ ～１０１．２％之间，ＲＳＤ（ｎ＝６）范围在１．１４～６．２６之间，满足食品中合成着色剂含量的检测需要。 　　【关键词】高效液相色谱法［合成着色剂［食品［检测 　　为了改善食品的色泽，人们常常在加工食品的过程中添加着色剂，以改善感官性质，增加食欲［１］。与天然色素相比，合成着色剂具有色泽鲜艳、着色力强、性质稳定和价格便宜等优点，但人工合成着色剂多为偶氮化合物，具有一定毒性，若使用不当会危害人体健康。许多国家和地区已对其使用范围、限量及相关的检测方法做了明确的规定［２．３］。目前，我国已批准使用的合成食用色素有２１种，常用的有苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、柠檬黄、靛蓝、日落黄及亮蓝等，这些合成着色剂被广泛应用于饮料、雪糕、糖果、糕点、果酱、调料、火腿、罐头等食品［４］。但是，在经济利益驱使下，我国食品中人工合成着色剂的超标、超范围使用现象屡禁不止。目前国家标准中给出的最佳方法是高效液相色谱法［５］，但其样品前处理技术是聚酰胺粉的吸附与解吸附方法，步骤繁琐，易造成损失［６］，样品经乙醇．氨水．水溶液提取后，蒸干耗时过长。并且使用紫外检测器于２５４ｎｍ波长下测定，无法顾及到不同组分的最大吸收波长［７］，且在紫外区域很多杂质都有吸收，干扰严重。本文采用快速液相色谱、ＶＷＤ多波长检测法，在可见光区域进行测定，不仅缩短了检测时间，提高了灵敏度，扩大了检测范围，而且大大简化了前处理方法。１实验方法１．１材料与试剂新红、柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝、诱惑红、赤藓红标准溶液，浓度均为１０００ｕｇ／ｍＬ。混合标准中间溶液（１００ｕｇ／ｍＬ）：准确量取适量的每种着色剂标准溶液，用水稀释成１００ｕｇ／ｍＬ的着色剂混合标准中间溶液。 　　甲醇（色谱纯）［乙酸铵（分析纯）［乙醇、氨水（分析纯）［超纯水［提取液：乙醇．氨水．水溶液（体积比５：１：４）。 　　样品（蛋白饮料、草莓、火腿、面包、辣条）为市售产品。１．２仪器与设备Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司），带紫外检测器（ＶＷＤ）［高速离心机（上海卢湘仪ＴＧ１８５０．ＷＳ）［十万分之一分析天平（岛津ＡＵＷ１２ＯＤ）［超声波清洗器（保定圣峰ＨＰ２８００Ｈ）［一次性注射式滤器［针式过滤器（ＰＴＦＥ亲水）。１．３色谱条件色谱柱：ＺＯＲＢＡＸＳＢ．Ｃ１８（２５０ｍｍtimes;４．６ｍｍ，５mu;ｍ）［流动相：Ａ为甲醇，Ｂ为２０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵［流速：１．００ｍＬ／ｍｉｎ［进样量：３０．００mu;Ｌ［柱温：２５℃［梯度洗脱及检测波长条件见表１、表２。 　　表１梯度洗脱程序 　　１．４样品前处理选取６个有代表性的样品：蛋白饮料、草莓、火腿、面包、辣条。 　　蛋白饮料：称取２．００ｇ样品（精确至０．０１ｇ）于１０ｍＬ容量瓶中，加入提取液并定容至刻度。摇匀，超声提取１５ｍｉｎ，７０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。取２．０ｍＬ上清液于１０ｍＬ刻度离心管中，氮吹至０．５ｍＬ左右，用纯水定容至１．０ｍＬ，经０．４５mu;ｍ针式过滤器过滤后，供ＨＰＬＣ测定。 　　草莓、火腿等：称取２．００ｇ样品（精确至０．０１ｇ）放入５０ｍＬ离心管中，加入１０．０ｍＬ提取液，摇匀，超声提取１５ｍｉｎ，７０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ。取４．０ｍＬ上清液于１０ｍＬ刻度离心管中，用氮气吹至１．５ｍＬ左右，用纯水定容至２．０ｍＬ，经０．４５mu;ｍ针式过滤器过滤后，供ＨＰＬＣ测定。２结果与分析２．１流动相的选择 　　以甲醇和乙酸铵溶液为流动相，通过改变二者浓度配比和梯度洗脱条件，分析其对目标化合物的分离度、峰形、出峰时间的影响。最终采用如表１所示梯度洗脱程序，在该条件下，各种着色剂的分离度、峰形、出峰时间均比较理想。 　　具体情况见图１。 　　图１：８种合成着色剂出峰情况（浓度６ｐｐｍ） ２．２检测波长的选择检测波长通常选择最大吸收波长，同时尽可能使得干扰成分