土壤中产生尿酶的细菌的分离与记数实验设计.docVIP

土壤中的分离记数 实验目的： 1． 培养基的制备2． 学习土壤微生物的分离方法 3． 细菌平板记数的方法 实验意义： 农业中所使用的化学配料绝大多数都能够被植物直接吸收，尿素在土壤中则需要先经微生物的分解作用才能够被植物吸收。分解尿素的细菌从存在动物尿的地方很容易分离到。具有活性很高的尿酶。其代表种为巴氏芽孢杆菌（Bacillus pasteurli）和尿素小球菌（Microc-oceus ureae）。经常在含有尿素（20%）并用碳酸铵碱化的培养基中旺盛繁殖。对自然界的尿素转化起重要作用。 普通尿素(N≥46.4%)是酰铵态氮肥，所含氮素需经尿素细菌分泌的尿酶分解转化为铵态氮后，才能被植物吸收，利用率一般为30%-40% 尿素细菌生存于土壤、厩肥及污水中，是好氧性或兼厌氧性的细菌，在强碱性培养基中生长良好，最低的PH值是7，利用铵盐或尿素作为氮源，利用各种有机物（单糖、双糖、淀粉、有机酸等）为碳源和能源。代谢类型为异养需氧型或兼厌氧型。 通过对土壤中分解尿素的细菌的分离过程，可以让学生对微生物有更深课的了解和直观的认识，培养学生学习微生物学的初级实验技能，还可以引发学生学习微生物学的学习兴趣。实验原理： 将细菌接种到以尿素为唯一氮源的选择培养基上进行培养。在这种情况下,其他微生物因缺少氮素而不能生长,只有分解尿素的微生物或者自生固氮微生物才能正常生长繁殖。经稀释的单个细菌在固体培养基会形成菌落，菌落的数量可以反映稀释液中细菌的浓度。实验过程： 1． 土样的采集 在长期使用尿素的农田内采集3-8cm深的土样200g用信封或牛皮纸袋带回实验室。 2． 培养基的制备 培养基配方 KH2PO4 1．4g Na2HPO4 2．1g MgSO4· 7H2O 0．2g 葡萄糖 10．0g 尿素 1．0g 琼脂 15．0g 将上述前5种物质溶解后，。然后倒入大搪瓷烧杯中，并向其中加入琼脂15．0g，用电炉加热至琼脂完全溶解。在培养基半冷却时分装至经高压灭菌的培养皿中。冷却备用。 3． 取10g土样容于90g水中，充分摇匀，然后在此溶液中取菌液1ml加无菌水9ml中继续稀释。以此方式继续将菌液稀释成一定浓度梯度。将稀释10000倍，100000倍及1000000倍的菌液各取0.1ml分别加入到事先培养基中，． 培养 将培养48～72小时。 ． 记数 记录各浓度（菌液稀释倍数）下每培养皿内菌落的数目，计算个培养皿内的平均值，进而计算出每克土壤中所含的细菌的数目,填写下表。