医学论文-HPV18 E7抗原HLA-DRB1-0301限制性Th表位的预测与鉴定.docVIP

医学论文-HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位的预测与鉴定 【摘要】??目的:初步鉴定人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-DRB1*0301限制性辅助T淋巴细胞（T-Helper?Cell）表位。方法:用SYFPEITHI软件预测HPV18?E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位，候选表位分别命名为P1、P2、P3，以固相多肽合成技术合成，并运用HPLC进行纯化和质谱法(MS)鉴定。以密度梯度法分离HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC)，合成肽刺激PBMC，用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测淋巴细胞增殖活性，流式细胞仪分析细胞表型。结果:多肽P1（HPV18?E780-94）在体外刺激PBMC后能够有效诱导CD4+?T淋巴细胞增殖。结论:P1（HPV18?E780-94）可能为HPV18?E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th细胞表位。? 【关键词】??人乳头瘤病毒?E7抗原?淋巴细胞?Th表位 ????Abstract:??Objective:?To?identify?HLA-DRB1*0301restricted?Th?epitope?derived?from?human?papillomavirus?18?E7?antigen.?Methods:?The?primary?structure?of?human?papillomavirus?18?E7?antigen?was?analyzed?using?T?cell?epitope?predictive?algorithms?SYFPEITHI?and?three?epitope?candidates?(P1,?P2?and?P3)?were?obtained.?The?candidate?epitopes?were?synthesized?with?solid?phase?strategies,?purified?with?reverse?phase?HPLC?and?identified?with?mass?spectrometry.?Peptide-specific?Th?cells?were?induced?from?the?peripheral?blood?mononuclear?cells?(PBMC)?of?HLA-DRB1*0301?positive?healthy?donors?by?stimulating?candidate?epitopes.?Proliferative?activity?was?analyzed?with?Brdu?cell?proliferation?assay.?Cell?phenotype?was?analyzed?by?FACS.?Results:?Peptide?P1（HPV18?E780-94）could?induce?proliferative?activity?in?vitro?specifically?and?effectively.?Conclusion:?Peptide?P1（HPV18?E780-94）can?be?the?HLA-DRB1*0301restricted?Th?epitope?of?human?papillomavirus?18?E7?antigen. ????Key?words:??human?papillomavirus;?E7?antigen;?lymphocyte;?T?helper?lymphocyte?epitopes ????作为妇女最常见的的恶性肿瘤之一，宫颈癌的死亡率位于全球妇女癌症死亡的第二位[1]，而人乳头瘤病毒（Human?papillomavirus，HPV）感染是宫颈癌发生的首要因素和中心环节[2]。HPV早期基因E7的表达在细胞癌变进程和维持癌细胞恶性表型方面起着重要作用，是维持肿瘤细胞处于转化状态所必需的[3]。E7抗原是HPV相关肿瘤特异性抗原，具有良好的免疫原性，成为研究最多的靶抗原。Th细胞免疫应答在特异性免疫应答中，可以辅助B细胞产生抗体以及辅助CTL活化而发挥免疫效应，并且激活的Th也能直接发挥免疫效应，因此Th表位的鉴定以及以此为基础的表位疫苗的研究也日益受到重视。本研究以HPV18?E7抗原作为靶标,预测并合成Th表位，以淋巴细胞增殖试验进行筛选和鉴定，初步获得HPV18?E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位。 ????1??材料和方法 ????1.1??靶抗原??由Genbank获得的HPV18?E7抗原由105个氨基酸组成，其序列见文献[4]。 ????1.2??Th表位预测??SYFPEITHI是能在互联网上免费使用的MHC-Ⅱ类表位预测的方法。将H