高产褐藻酸酶菌株的筛选、发酵条件优化和褐藻酸酶酶学性质的初步研究.pdf

高产褐藻酸酶菌株的筛选、发酵条件优化 和褐藻酸酶酶学性质的研究 摘 要 本研究以筛选高效产褐藻酸酶菌株、研究酶的生物学效应、酶学性质及酶法 降解褐藻胶制备褐藻胶寡糖为基本目的和出发点，从海洋环境中分离筛选出一株 高产褐藻酸酶的菌株s4。 本实验利用褐藻酸钠作为唯一的碳源从绿烂病海带的病烂处筛选分离得到 一株高产褐藻酸酶的菌株s4并对其发酵条件进行了研究。结果表明：通过单次单 因子实验确定褐藻酸降解菌株s4较优的产酶培养基主要成分的浓度为(w／v)．-褐藻 酸钠1．2％，氧化铵O．9％，NaCI 1．5％，较优的发酵产酶条件为：起始pH为7。5， 25℃培养48h。 菌株s4在优化后的发酵培养基中25C培养48h后，经离心、30％～90％的 Fast S-100柱层析对褐 Flow和Sephacryl @rt4)2s04盐析分级沉淀、CM·Sepharose 藻酸酶进行纯化和精制，获得了电泳纯度的酶蛋白组分。SDS．PAGE确定其分子 量为29kDa,该褐藻酸酶的最适作用温度和最适反应pH分别为40C和7．0，酶活力 6．0-9．0范围内和45C以下时相对稳定。二价金属离子对褐藻酸酶的活性有 在pa 不同程度的影响，其中H矿+对褐藻酸酶活力的抑止作用最为明显，而M矿、Na+ 和K+均对酶活有促进作用。在40C，pH7．5时降解底物，发现酶对底物有专一性， 而且在一定范围内，酶促反应随着底物浓度的增大丽增强。 关键词：褐藻酸酶；培养条件优化；分离纯化；酶学性质；褐藻胶寡糖 on and an Effectively StudyScreeningSelecting Cultivationand Strain，itsOptimal Alginase-producing Characteristics ofAlginase Abstract With of and all the selectingeffectively purposesscreening andcharacteristicsand the effect biological ofalginaseusingalginase strain，studying to strainshavebeenisolatedwith producealginateoligosaccharides．several alginase of these fromthe Laminaria stralii5，the activity decayingparts japonica．Among second and strains4showedthe