Delftia+tsuruhatensis+AD9苯胺降解关键酶基因的功能鉴定和表达调节研究.pdf

第一章引 言 环境污染是当今世界所面临的重大问题之一，目前在世界范围内约有5万种工业用化合 物通过各种途径进入生态环境，其中相当一部分化合物难以自然降解，欧期残留在环境中， 直接对生态环境及人类健康造成极大的危害(李汉卿1985)。据中国环境状况公告近十来年统 计的数据，我国每年的废水总排放量(不包括乡镇上业)为350一420亿吨，其中T业废水约 占了200多亿吨。约1，2的工业废水处理达不到国家排放标准，l，3工业废水未经处理排放到 环境中，严重污染了环境。80％以上工业废水的含有芳香族化台物，其中青有多环芳烃和苯胺、 苯酚类环境毒害性物质的上业废水由于其化学结构的稳定性而难以被自然降解。苯胺作为化 学合成的芳香族化台物的典型代表，是重要的化工原料和精细化__L=中间体，广泛应用于染料、 农药、制药、橡胶等行业生产中(Meyer 甜以199l；Chung封口￡1997)。 有机污染物的生物处理具有巨大的潜力，具有速度快、消耗低、效率高、成本低、反应条 件温和以及无_二次污染等显著优点。自然界中，微生物是种类繁多，分布广泛，具有个体微 小、代谢能力强、繁殖快、易变异和适应性强等特点；在物质循环和能量转化中起着十分重 要的作用，是环境净化的主要承担者，在污染物的去毒、降解和矿化中起主导作用(Alexander 1981)。微生物经过长期的自然选择，具备稳定的特殊结构、机能和遗传基因，以应答相应的 强烈的环境限制因子。可适应性获得一些有机化合物降解能力或重金属抗性(Aelion1987， 1988tMadsen Barkay 1991，swindou 1988，shi唧1987)。因此，开发和利用丰富的微生物资 源，获取具有高效降解能力的微生物菌株；研究降解代谢途径相关基因及其表达调控，提高 降解微生物的耐受和有效降解污染物的能力。在理论和实际应用上有着十分重要的意义。 1．1苯胺代谢途径的研究进展 许多科学家对苯胺降解菌的功能特性和遗传机理进行了大量而深入的研究，揭示了微生 物降解苯胺的生化机理、苯胺代谢途径的组成和相关酶系的功能。 微生物在好氧条件F，降解途径的第一步是苯胺氧化成邻苯二酚。催化此步反应的酶就 是关键酶苯胺双加氧酶。Bachofer等1975年证明1r在诺}氏菌通过加双氧反应形成邻苯二酚， 他第‘次提出苯胺降解的邻位裂解(ornlo)一开环途径。并与L0idlM在1990证明了苯胺降 解途径中邻苯二酚l，2双加氧酶催化邻位裂解开环。Heim，v1979第一次提出苯胺降解的间位 裂解(1T∞ta)-开环途径。Aoki K等人1990证明苯胺降解间位裂解途径的邻苯二酚2，3双加氧 酶作用。 许多芳香族化合物降解的第一个中间产物都是邻苯二酚，微生物在好氧条件F，降解途 径的第一步是苯胺氧化成邻苯二一酚(图l—1)。而邻苯二酚降解可以通过两种代谢途径，即邻 双加氧酶催化。当苯胺通过邻何代谢途径时，在两个羟基之间切割邻苯二酚，再经多步反廊 中国农业科学院硕士学位论文 引 言 产生三羧酸循环的中间代谢物琥珀酸和乙酰辅酶A。当苯胺通过间位代谢途径时，在其中一 个羟基的旁侧切割儿茶酚，最后产生丙酮酸和乙醛。假单胞菌的某些菌株可以通过间 NH ／≮r一扯Lc∞H 以。』“ T叫叩ha” f Catech叫 图1．】苯胺降解成邻苯二酚是苯胺降解途径中的关键第一步 F嘻1一】The丘fst anilineintoca【echol key蚍epistodegrade (MeIacle副期嘲 。H(帆de觚㈣ C撤h。I metapyrDc越e甘鼠∞