适合转基因大豆GTS+4032复合PCR检测标准分子研制及番茄内标准基因国际协同验证.pdfVIP

适合转基因大豆GTS 40-3-2 复合PCR 检测标准分子研制 及番茄内标准基因国际协同验证 摘 要 为保障我国转基因产品标识管理制度的顺利实施，本文主要从两个方面开展了转 基因产品检测技术研究。 1. 适合转基因大豆GTS 40-3-2 复合PCR 检测的标准分子研制：标准物质在转基因 产品的定量分析中非常重要，是定量的标尺。针对目前使用的标准质粒分子不能用 于复合PCR 检测的缺点，本文以转基因大豆品系GTS 40-3-2(Roundup Ready Soybean, RRS)为研究对象，研制了一种适合RRS 复合PCR 检测的标准质粒分子。此质粒分 子分别将RRS 的三个外源检测片段(CaMV35s, NOS 和RRS 品系特异性片段)和大豆 内标准基因(Lectin)片段构建在质粒的不同插入位点上，并通过实验方法对此质粒分 子在复合 PCR 中的适用性进行了证明。复合PCR 定量结果表明，新构建的质粒分 子对大豆样品定量分析的偏差在 10%以内，检测下限和定量下限分别是10 和50 个 拷贝，说明此质粒分子可以代替传统的标准物质，作为RRS 复合定量检测的标准物 质。此标准分子克服了现有质粒不能用于复合检测的缺点，提高检测通量，减少检 测时间和成本。 2. 番茄内标准基因国际协同验证：本文在实验室已获得的番茄和水稻内标准基因 Lat52 和SPS 工作基础上，组织国际协同实验，邀请国内外14 个实验室分别对番茄 和水稻内标准基因Lat52 和SPS 进行了验证。番茄验证实验返回的 13 个实验室的结 果表明，Lat52 基因具有内标准基因的三个特征，即种间特异性、种内非特异性和恒 定的低拷贝数。Lat52 基因定性PCR 检测灵敏度为0.1% ，定量PCR 检测下限和定量 下限为10 个拷贝。定量PCR 对8 个番茄盲样分析的偏差在 1.94%到10.64%之间， 1 说明Lat52 适合作为番茄的内标准基因，对转基因番茄样品进行定性和定量PCR 检 测。 关键词 转基因植物(GMOs)，质粒标准分子，复合PCR ，内标准基因，国际协 同验证，番茄(Lycopersicon esculentum) 2 A NOVEL PLASMID MOLECULE FOR DUPLEX QUANTITATIVE PCR ANALYSIS OF ROUNDUP READY SOYBEAN AND INTERNATIONAL VALIDATION OF TOMATO ENDOGENOUS REFERENCE GENE ABSTRACT To ensure the labeling requirements of genetically modified organisms (GMOs) in China, two aspects that related to GMOs identification and quantification are covered in this study. Development of a novel plasmid molecule for duplex quantitative PCR analysis of GTS 40-3-2 (Roundup Ready Soybean, RRS) Certified Reference Material (CRM) is the prerequisite for GMOs identification and quantification. However, the present standard molecules were not suitable for duplex PCR analysis of GMOs. In this study, we developed one unique plasmid molecule as the reference ma