链状亚历山大藻环境条件响应基因的筛选及我国北黄海海域微型藻的分离鉴定.pdfVIP

链状亚历山大藻环境条件响应基因的筛选及我国 北黄海海域微型藻的分离鉴定 摘 要 (一) 随着全球工业化的发展，环境状况墨益恶化，赤潮频繁发生。研究发现水体 富营养化及微量元素是赤潮生物爆发性生长的因素。但目前为止尚未有报道把赤 潮爆发的环境条件和分子生物学研究联系起来，从分子角度揭示赤潮爆发的内在 机制。普遍的研究认失，离浓度的磷、锰对链状亚历出大藻的生长具有促进作用， 本研究把利于赤潮生物生长的环境条件和分子技术结合，构建与高磷浓度诱导相 关的链状亚历山大藻基因表达抑制性消减文库，并在锰条件诱导生长细胞中进行 基爨表达的验证，使得到的基嚣片段既与链状亚历蠢大藻离磷浓度生长相关，又 与其高锰浓度生长相关，从而减少藻体对单一因子的响应丽产生的假阳性，为获 得赤潮爆发性生长相关基因及其应用奠定基础，为赤潮预报和防治提供资料。 经对不同磷浓度条镩下链状亚历出大藻消减文库的383个克隆进行检测，获 得348个阳性克隆，阳性率达90．9％，后采用两轮斑点杂交，即将获得的348个克 隆的PCR产物纯化后先与低磷和高磷的cDNA探针进行杂交，选取杂交信母差异在 王。4倍以上的克隆，眷分别与无锰及高锰的cDNA探针杂交，选取杂交信号差异在 1．4倍以上阳性克隆12个测序，获得了6个可分析的基因片段，分别与生长、翻译 起始和能量传递有关，其中2个为编码未知功能蛋白基因片段，1个与转化蛋白功 能有相戗性，但相似性较低。对己知功能的3个基因片段设计弓|物，采用荧光定 文库筛选及斑点杂交中得到的信息一致。初步认为在赤潮爆发性生长中eIF．4A基 因的表达量增多，通过影响和秀嚣强翻译的起始，起始或加速了细胞的快速生长分 裂。 关键词：赤潮；链状亚历山大藻；环境条件晌应基因；抑制性消减杂交； 荧光定量POR (二) 在海洋初级生产中，微型浮游生物是非常重要的贡献者，因为在水域中微型 浮游生物的分布密度极大，是浮游植物的主要组成部分，可维持相当高程度的生 产力。但目前针对微型浮游生物的分类研究较少，涉及的未认定物种较多，没有 统一的分类学目录，鉴定较为困难，从而使微型藻的研究进展缓慢。 为了丰富微型藻的记录种类和科研的需要，我们在进行海洋微型浮游生物调 查的同时，将固定化样品经一系列处理后，借助扫描电子显微镜(SEM)对原甲藻 属一浮游植物进行了观察描述，藻细胞呈圆形至椭圆形，长约15．23岬，宽为 8．151比m，细胞表面有数量丰富的颗粒状突起，每平方微米有7．10个颗粒状突起。 藻体的中央有1条片间带， 片间带宽度大约为0．6．1．51ma之间，有渐狭趋向， 最后呈中缝状。在片间带之间同样存在颗粒状突起。细胞壳面观在片间带上方壳 面边缘有刺丝胞孔，刺丝胞孔周围分布2．3个辅助孔。经比较发现该藻细胞表面 结构和原甲藻属中的微小原甲藻，东海原甲藻虽有相似之处，但在某些基本特征 上存在明显的差异，由于甲藻分类学尤其是微型藻分类本身存在的局限性，且在 采集水样后，不能立即进行大量的生物培养，所以无法进行进一步的分子生物学 鉴定命名，我们只将其划分为原甲藻属的一未定种Prorocentrum sp． 另外，将未固定的样品经一系列过滤处理后，培养于F／2培养基中，经有限 稀释法分离纯化到一株微型硅藻，经扫描电子显微镜及透射显微镜下观察，和 库中相近物种的18srDNA设计引物，PCR扩增其18rDNA序列，经测序鉴定， 与Minutocellus 高度保守性，其分类阶元只能划分到属，而种间划分则需要获得相关的5．8SrDNA 及ITS序列，但目前尚未有Minutocellus polymorphus相关区域序列的报道，无 法进行进一步的种间鉴定，结合细胞形态学和分子生物学的鉴定，推测分离纯化 的微型硅藻为MinutocellusHalse属的一新记录种，也可能是多形微眼藻 Minutocellus 一步的考证研究。 关键词： 微型浮游植物：原甲藻属：微眼藻属：18SrDNA；分类 II Screeni