耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在酶解玉米芯木聚糖中的应用.pdfVIP

林业工程学报，2017，2(4)：63—69 Journal of ForestryEngineering doi：10．13360／j．issn．2096—1359．2017．04．011 耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在 酶解玉米芯木聚糖中的应用 李琦，陈明真，赵林果 (南京林业大学化学工程学院；江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室，南京210037) 摘要：为寻求具有耐热性能的木聚糖酶，笔者以嗜热网球菌(Dictyoglomus 083 模板，克隆得到木聚糖酶基因xynB—DT，该基因全长lbp，共编码361个氨基酸，蛋白的理论分子量约为40 ku。通过NCBI数据库比对发现该基因编码的蛋白质属于糖苷水解酶G11家族。实现大肠杆菌异源表达重组 U／mL。该重组木聚糖酶的最适温度为850C，在60～80℃范 木聚糖酶XynB—DT，通过IPTG诱导，酶活达到30．6 围内均有较好温度稳定性，在60℃条件下保温2h，酶活维持在90％以上，在90℃下保温2h，酶活尚残余约 h仍可保留约90％剩余酶活力。该酶以Beechwood木聚 50％；最适pH为6．5，在pH为5．0—7．5范围内保温24 糖为底物，米氏常数(K。)和最大反应速率(k。，)值分别为5．63ms／mL和1．572mmol／(L·min。1)。以玉米芯木 聚糖为底物，研究XynB—DT水解玉米芯木聚糖的条件及产物，结果显示在温度70℃、pH6．0条件下酶解12h，加 酶量为400U／g，最终酶解得率为44．3％，玉米芯木聚糖的水解产物主要以木二糖和木三糖为主，表明该木聚糖 酶在低聚木糖制备方面具有较大应用潜能。 关键词：嗜热网球菌；木聚糖酶；克隆；水解 中图分类号：Q819 文献标志码：A 文章编号：2096-1359(2017)04-0063—07 and ofa GHll and Cloningexpressionthermophilexylanasegene its applicationin×yIooIigosaccharideproduction LIQi，CHENMingzhen，ZHAOLinguo+ Fuelsand Chemical BiomassBasedGreen of Forest，)1University；JiangsuKeyLaboratoryof (College Engineering，Nanjing 210037，China) Chemicals，Nanjing wasclonedand GH1 1 from DSM3960 Abstract：The Dictyoglomusthermophilum endo一1，4-xylanasegene，xynB—DT