利用抑制性消减杂交技术分离草莓抗炭疽病相关基因-天恩泽.pdfVIP

中国农学通报 2011,27(13): 183-187 Chinese Agricultural Science Bulletin 利用抑制性消减杂交技术分离草莓抗炭疽病相关基因 1 1 1 1 2 苗立祥 ，张豫超 ，杨肖芳 ，张跃建 ，王汉荣 ， 1 1 1 吴延军 ，张慧琴 ，蒋桂华 1 2 （浙江省农业科学院园艺研究所，杭州310021 ；浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所，杭州310021） 摘 要：利用抑制性消减杂交技术（suppression subtractive hybridization，SSH），比较接种炭疽病菌与未接 菌草莓之间的基因表达差异，筛选抗草莓炭疽病菌的差异表达基因片段，为草莓抗炭疽病遗传育种提供 理论依据。分别提取接种草莓与未接种草莓叶片的总RNA ，分离mRNA ，逆转录成cDNA ，利用Rsa I 进 行酶切，然后以接种叶片酶切cDNA 为试验方（tester ），以未接菌草莓叶片酶切cDNA 为驱动方（driver ）， 构建了草莓抗炭疽病基因消减文库。菌落PCR 结果表明，插入片段大部分在100~ 1000 bp 之间，文库质 量好。对文库中1500 个阳性克隆进行测序，共得到了1377 个有效的ESTs 序列。利用NCBI 数据库进行 Blast 同源性比较发现，这些ESTs 可能与胁迫反应、信号转导、蛋白合成、蛋白相互作用、物质代谢、跨膜 通道、转录因子、金属转运及未知或假定蛋白等有关，ESTs 序列的获得为后续草莓抗炭疽病相关基因的 克隆、表达和转基因研究提供了参考。 关键词：草莓；抑制性消减杂交；草莓炭疽病；cDNA 文库 中图分类号：S668.4 文献标志码：A 论文编号：2010-3483 IsolationandCloningofcDNAInducedbyColletotrichumgloeosporioidesvia SuppressionSubtractiveHybridizationinStrawberry 1 1 1 1 2 MiaoLixiang,ZhangYuchao,YangXiaofang,ZhangYuejian,WangHanrong, WuYanjun,ZhangHuiqin,JiangGuihua1 1 1 1 (Institute of Horticulture, Zhejiang Academy of Agricultural Science,Hangzhou310021; 2Institute of Plant Protection and Microbiology, Zhejiang Academy of Agricultural Science,Hangzhou310021) Abstract: To uncover the mechanism of strawberry inoculated with Colletotrichum gloeosporioides and comparegeneexpressdifferenceofthetreatedanduntreatedleavesbyusingthe