番茄红素对tnf-α诱导人脐静脉内皮细胞损伤保护作用word论文.docxVIP

番茄红素对 TNF-α 诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用目的：硕士研究生：颜林淋导师：刘厂辉教授观察番茄红素对肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)损伤模型， 基质金属蛋白酶（metalloproteases，MMP）-9的表达的抑制作用，进一步探讨该 药的药理作用，为该药的临床应用提供可靠的实验依据。方法：体外培养HUVEC，并根据不同的实验目的分为5组：（1）空白对照组（A组）；（2）TNF-α组（B组，加入终浓度为50ng/mL TNF-α作用24h）；（3）番茄红素低 剂量组（B组：HUVEC细胞经1μmol/L 番茄红素预处理1h后，加入50ng/mL的 TNF-α孵育24h）；（4）番茄红素中剂量组（C组：TNF-α+5μmol/L番茄红素）；（5） 番茄红素高剂量组（D组：TNF-α+10μmol/L番茄红素）。孵育结束后，WST-1法 检测HUVEC细胞增殖情况，ELISA检测MMP-9产生，明胶酶谱实验检测MMP-9 的活性改变情况。分别提取核蛋白和胞浆蛋白，Western blot检测（蛋白质印迹法） NF-κB p65核转位，以及胞浆磷酸化I-κB的水平改变情况。结 果：（1）0～10μmol/L番茄红素对细胞无明显毒性作用。当其浓度为15μmol/L 时，细胞活性降低了7%；（2）50ng/mL TNF-α作用24h后，对HUVEC生长抑制率为32%，而1，5， 10μmol/L番茄红素预处理 HUVEC 后 ， 生 长抑 制 率 分 别 降至 20.4% ， 14.6%和4.51%；（3）TNF-α诱导HUVEC后，MMP-9浓度为（1.17±0.24）ng/ml，1，5，10μmol/L 番茄红素能以剂量依赖性方式抑制TNF-α诱导的MMP-9产生，并能抑制其活性；（4）正常对照组细胞核内几乎未检测到NF-κB的活性亚基p65；TNF-α处理224h后，核内p65亚基显著增多。不同浓度番茄红素处理后，细胞核内p65亚基含量随着浓度的增高而降低；（5）HUVEC在静息状态下，胞浆内I-κB磷酸化水平很低。TNF-α诱导后，I-κB磷酸化水平迅速增高。番茄红素预处理能有效抑制I-κB的降解。结 论：（1）番茄红素能抑制TNF-α诱导的HUVEC细胞表达MMP-9；（2）番茄红素抑制MMP-9的产生可能与抑制NF-κB的激活有关。关键词：番茄红素；TNF-α；人脐静脉内皮细胞；NF-κB3Protective effect of lycopene on TNF-α-induction endothelial cell injuryObjectiveTo observe the protective effect of lycopene on TNF-α-induction endothelial cell injury, and then explore its further pharmacologic actions, and provide reliable experiment evidence for clinical application.MethodsHUVEC cells were cultured in vitro, and then were divided into 5 groups according to the protocols: (1)Negative control (group A); (2) TNF-α (group B, 50ng/mL TNF-α); (3)low-dose of lycopene (group C, 1μmol/L lycopene for 24h and then 50ng/mL of TNF-α was added); (4) middle dose group (group D, 50ng/mL of TNF-α with 5μmol/L lycopene); (5) middle dose group (group E, 50ng/mL of TNF-α with 10μmol/L lycopene). After treatment, cells proliferation was detected by WST-1; secretion of MMP-9 was determined by ELISA; the activity of MMP-9 was measured by gelatinase experiment. Cytosolic and nuclear extrac