人泡沫逆转录病毒介导的siRNA抑制HBV基因表达与复制.pdfVIP

第53卷第4期 武汉大学学报(理学版) V01．53No．4 Univ．(Nat．Sci．Ed．) 2007年8月 J．Wuhan 文章编号：1671—8836(2007)04—0463一08 人泡沫逆转录病毒介导的siRNA抑制 HBV基因表达与复制 孙 燕1，李利君2，刘 辉3，李 治1，李文鑫3 (1t陕西师范大学生命科学学院，陕西西安710062；2．集美大学生物工程学院， 福建厦门361021；3．武汉大学生命科学学院／病毒学国家重点实验室，湖北武汉430072) 摘 序列：s2和x1．s2和x1被克隆到人泡沫逆转录病毒(humanfoamy virus，HFV)载体中，构建成为分别表达s2和 分析的结果表明这些siRNA表达载体可以有效抑制多个HBV基因的表达和病毒DNA复制；并且其抑制作用是 长期的，可以持续到转导后3个月． 关键词：人泡沫逆转录病毒；病毒载体}RNA干扰；小干扰RNA}抗人乙肝病毒 中嗣分类号：Q939．47 文献标识码：A 0 引言 模板又是病毒DNA复制模板，且所有转录子含有 相似的37末端，因此理论上不同的病毒RNA均能 人乙型肝炎病毒(HBV)感染一直是公众健康 的重大威胁．尽管目前已有多种HBV疫苗，全球仍 同一siRNA所阻断． 有超过20亿人被感染，其中3．5亿是HBV携带 者”“]．这些携带者是慢性肝炎、肝硬化和肝癌等 于两个要点，第一个要点是筛选到有效抑制HBV HBV相关疾病的高危人群，每年有超过】百万的 HBV携带者死于这些疾病“。．f临床上干扰素和核苷 类药物协同治疗HBV感染并没有取得突出的疗 效，因此仍迫切需要开发新的有效的HBV治疗手 段． 高效抑制能力”’“．第二个要点是建立一个有效的 RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是真核 细胞内的一个自然过程，是由双链小干扰RNA 载体系统． (smallinterferingRNA，siRNA)介导的序列特异目前基于脂质体转染试剂导人合成的siRNAs 的转录后基因沉默机制．RNAi可能是机体对于转或质粒表达载体在动物中都是不适用的，而病毒载 座子或病毒感染的宿主防御机制的一种进化结 体是胞内转入表达siRNAs的首选．在本研究中，结 果o。…．在人类疾病治疗的研究中，人们期望采用这 种新手段特异性地抑制某些基因的表达，使这些基 达载体系统，筛选出可以有效抑制HBV基因表达 因保持在静默或休眠状态，从而达到治疗目的．最近 RNAi已经用于抑制几种人类致病病毒的复制，其 中HBV是RNAi技术应用的合适对象：因为HBV制作用进行了分析． 收稿日期；2007—04—10 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：孙燕(1975)，女，副教授．博士，现从事分子病毒学方向研究 464 武议大学学报(理学版) 第j3卷 1 材料和方法 37和Pu6 GATATAT-3 7扩增人U6启动子．引物P。。F含有 Aec 1．1材料 llI位点，可以直接将PCR产物克