恩施黑猪PTGFR基因SNP检测及遗传多态性分析毕业答辩演示课件.pptVIP

题目:恩施黑猪PTGFR基因SNP检测及遗传多态性分析 学 生：毕四海 指导老师：杨 军 班级：动科31002班 核心组成 结果与分析 小结与讨论 致谢 材料与方法 前言 前言 我们都知道，母猪有发情周期，其本质是受下丘脑—垂体—卵巢轴系调控而产生的周而复始的生殖生理变化。 发情前期 黄体进一步液化，卵泡开始发育； 发情期 卵泡发育成熟； 发情后期 成熟卵泡破裂、排卵，黄体开始形成； 间情期 黄体逐渐发育，并达到最大，孕激素分泌量也随之逐渐达到最高水平，性中枢受到抑制。 若是母猪未成功受孕，其子宫内膜产生的前列腺素PGF2α通过逆流途径促进黄体退化，使之进入下一个发情周期；反之若母猪妊娠,则转化为妊娠黄体。这种暂时性的分泌器官分泌的孕酮是维持妊娠的主要激素。由于猪的胎盘不能分泌足够的孕酮来维持妊娠，在此不再赘述。 主要激素的变化 雌激素 妊娠早期,雌激素(Estrogen)主要来源于黄体。随着妊娠期的增长,在母体产生的雌激素以及胎儿皮质醇增加的影响下,胎盘产生的雌激素逐渐增加,分娩时达到最高峰。在分娩前,体内雌激素的水平增高而孕酮浓度下降,导致孕酮与雌激素的比值发生变化,使子宫肌层对催产素的敏感性增高。妊娠期间雌激素可以调节孕酮的合成和分泌。分娩时,雌激素可能通过对孕酮的抑制作用、刺激催产素受体的发育、刺激前列腺素的合成和释放增强子宫肌层的自发性收缩。 孕酮 在妊娠早期维持妊娠所需的孕酮来自于黄体。 妊娠的中后期，孕酮主要作用有五个方面：促进子宫内膜的基质细胞蜕膜化；抑制雌激素和催产素等对子宫肌层的收缩作用,使子宫保持静止,保证胎儿生活在一个平衡稳定的环境中;抑制前列腺素的合成,保持子宫肌层处于静止状态,抑制子宫节律收缩的起始；能够抑制一些与免疫排斥相关的免疫反应；能够抑制T细胞介导的组织感染,赋予着床的胚胎和发育的胎盘免疫能力。 动物实验证明,孕酮浓度的降低伴随有PGF2α的分泌增多。孕酮浓度降低使抑制子宫肌层收缩的作用被解除。在家畜中,胎儿成熟时分泌的糖皮质激素能够刺激子宫分泌前列腺素,它可以顺着子宫颈进入母体的腹腔溶解黄体。但是临产前和分娩时孕妇的孕酮浓度反而高于妊娠的其他阶段,这有可能是由于孕酮受体不同亚型表达比例发生变化,导致孕酮不能够发挥作用。 妊娠期的QTL定位 QTL是在基因组中占据一定染色体区域,控制某一数量性状的一组微效多基因的集合(或基因簇)。 通过基因组扫描的方法国外学者发现在1号、9号、15号染色体上可能存在控制妊娠期的QTL。但控制猪妊娠期的候选基因研究尚未见报道。根据双直接荧光原位杂交发现人的7、11号染色体与猪的9号染色体是部分同源的,而影响猪妊娠期的一段区域是和人的1号染色体的部分区域是同源的,我们从人的这部分区域寻找妊娠过程中有重要作用的基因Renin和IL-10,与猪妊娠期的相关关系进行研究。本研究的目的是检测影响猪妊娠期长短的候选基因PTGFR（前列腺素F2α受体基因）的核酸多态性，并对其遗传多态信息进行分析，为揭示猪的妊娠期的遗传机理打下基础。 材料： 40头恩施黑猪来自长江大学动物科学学院实验猪场，耳组织取样。所采集的组织样均放入70%的乙醇中，-20℃保存。 设备： Sigma常温高速离心机、Sigma冷冻高速离心机、水平电泳槽、电泳仪、低温恒温水浴槽、超纯水仪、梯度PCR仪、凝胶成像系统、海尔超低温冰箱、海尔冰柜、pH计、紫外风光光度计、高压灭菌锅、制冰机、电子天平、电热恒温鼓风干燥箱、美的微波炉、超净工作台、分子杂交炉、可调式微量移液器 药品和试剂： M Tris-Cl（pH8.0)、0.5M EDTA（pH8.0）、100mM NaCl、50×TAE、5M乙酸钾、6M氯化锂、10%APS、EB染色液、10mg／ml蛋白酶K、TE缓冲液(pH8．O)、溴化乙锭（EB）、三羟甲基氨基甲烷（Tris），西班牙琼脂糖（分装）、10mM dNTP Mix、PCR引物由上海捷瑞生物合成，用超纯水配制成25pM/μl的工作液，-20℃保存、无水乙醇、三氯甲烷、异丙醇、乙醚等常规试剂由长江大学动物科学学院动物基础实验室提供。 材料与方法 方法： 1、猪耳组织基因组DNA提取 2、基因组DNA样品浓度和纯度检测和稀释 3、PTGFR基因扩增引物设计与合成 4、 PTGFR基因扩增 试剂 体积（μl） 10×PCR Buffer 2.5 dNTPs