15 噬菌体展示技术的原理PPT.ppt

噬菌体展示技术的原理 噬菌体展示的基本概念 将外源蛋白质或多肽的基因表达产物与噬菌体衣壳蛋白融合,并在其表面展示,同时将其遗传密码信息整合到个体噬菌体的基因组中。直接将可见的表达型与其基因型联系在一起,利用其配体的特异性亲和力,将所感兴趣的蛋白 质或多肽挑选出来。 多年来,噬菌体展示技术被用于抗体的制备、多肽及蛋白质和酶的制备。特别是近几年来,该技术被作为一种新工具用于多肽和蛋白质药物的发现与研制、蛋白质与蛋白质的相互作用及蛋白质与DNA相互作用的研究、蛋白质结构和功能的研究以及基因治疗药物的定向传递等多方面 的研究。 一、噬菌体展示技术的原理 Lead Hv Link Lv PIII PIII 表达型 融合蛋白 PⅢ 菌毛蛋白 3～5个拷贝 PⅧ 主要衣壳蛋白 2700～3000个拷贝 基因型 噬菌体展示技术是将各种多肽或蛋白质以融合蛋白的形式表达并展示在噬菌体表面，同时将其遗传密码包含于噬菌体内部，这使得蛋白质的功能与其基因密码有机的连结在一起。 选择方法： 淘选（Panning) 而不是 筛选（Screening) Solid phase selection with immunotubes B B B B B B v v Immunotube coated with antigen coated with steptavidin and biotinylated antigen B biotin antigen Solution phase selection with biotinylated antigen Wash to remove unbound phage particles. Elute bound phage Amplify eluted phage Repeat selection Analyze a) ELISA b) Specificity c) Sequencing d) Affinity e) Activity E.coli 感染 和扩增 固相 淘选系统 完整细胞 组织，器官 常规法 淘选方法 正负法 竞争法 噬菌体展示技术最关键的优势有三： 第一，淘选的高效率使得在极低的存在 水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能； 第二，所挑选到的噬菌体可在微量存在的情况下，通过感染细菌得到富集； 第三：展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接，使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。 噬菌体（M13, T7, T4, ?) 病毒（反转录病毒，杆状病毒） 表面展示系统 细菌（葡萄球菌，E. Coli) 酵母 体外共价连接（蛋白—DNA, 蛋白—RNA) 诊断 被动免疫 抗体 蛋白质结构分析 药物导航 蛋白质纯化 应用范围： 受体—配体 信息传递