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电泳法概述 电泳法分类 电泳的分类 1、是否具有介质分为： 自由界面电泳 区带电泳 2、按其介质的物理性状不同可分为： (1)滤纸及其它纤维电泳：如玻璃纤维膜、乙酸 纤维膜、聚胺纤维薄膜。 (2)凝胶电泳：如琼脂、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉 凝胶电泳。 (3)粉末电泳：如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳。 (4)线丝电泳：如尼龙丝、人造丝电泳。 3、按支持物的装置形式不同，区带电泳可分为： (1)平板式电泳：支持物水平放置，是最常用的 电泳方式。 (2)垂直板式电泳：如聚丙烯酰胺凝胶可做成垂 直板式电泳。 (3)垂直柱式电泳：如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳。 4、按pH的连续性不同，区带电泳可分为： (1) 连续pH电泳：即整个电泳过程pH保持不变，如 常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。 (2) 非连续pH电泳：缓冲液和电泳支持物间有不同 的pH的电泳，如聚丙烯酰胺凝胶盘状 电泳，等电聚焦电泳等。 界面电泳 ：在没有惰性支持物的液体接界面上进行的电泳。 区带电泳： 是在溶液中加入一些惰性物质或凝胶物质作为支持物，泳动物质在支持物间隙中移动的电泳方法。 避免对流的干扰。 设 备 垂直型电泳槽 电泳仪 凝胶成像系统 迷你垂直型电泳槽 DNA序列分析电泳槽 中型双垂直电泳槽 实验室常见的电泳装置 水平电泳 （核酸电泳） 血清醋酸纤维素薄膜电泳 三、操作步骤 1. 准备 醋酸纤维素薄膜的预处理：将薄膜小心放入盛有缓冲液的培养皿内，使其漂浮在液面；用镊子轻压，使其全部浸入缓冲液内。待膜完全浸透（约半小时）后取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时分辨出光滑面和粗糙面。 标记：在粗糙面上用铅笔距薄膜条一端1.5cm处划线即为点样线并作好标记，同时标上学号和正负极。 2. 点样 在薄膜的粗糙面点样。点样时，先用移液枪将5微升血清均匀地涂在点样器表面，再用点样器“印”在薄膜的点样区内，样品呈线状，宽约1-2mm。 3. 电泳 将点样后的薄膜使粗糙面（点样面）向下，点样端置于负极，贴在电泳槽支架的“滤纸桥”上，平衡5min。 打开电源，调节电压和电流强度。调节电压至100-120V左右，电流强度为0.4～0.6mA/cm薄膜条宽，电泳时间1小时左右。 4. 染色 电泳完毕立即取出薄膜，直接浸入染色液中，染色5-10min。 5. 漂洗 用漂洗液漂洗，不停摆动薄膜条，每5min左右换一次液，连续更换三次，可使背景颜色脱去。将膜夹在干净滤纸中，吸去多余溶液。 操作中，注意控制染色和漂洗的时间，防止背景过深或某些区带太浅。 分清薄膜的点样面 注意点样样品的宽度和力度 注意薄膜放置的方向 控制染色及漂洗时间 不可用手接触薄膜，必须戴手套 保持良好的实验秩序 8.3.2 醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。 这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少，5μg的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 8.3.4 琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取来的，为一种聚合线性分子，一般含有多糖、蛋白质和盐等杂质，杂质的含量每个厂商和批号的产品不尽相同。对DNA 电泳迁移率的影响也不一样，经化学修饰后熔点降低的琼脂糖叫低熔点琼脂糖，其机械强度无明显变化，主要用于DNA的限制酶原位消化、DNA片段回收以及小DNA片段（10～500 bP）的分离。琼脂糖凝胶的孔径取决于琼脂糖的浓度。 8.3.6 毛细管电泳技术 一、毛细管电泳的分类 （1） 毛细管区带电泳法（Capillary Zone Electrophorsis,CZE） 毛细管区带电泳（又称毛细管自由溶液区带电泳法）是毛细管电泳中最简单、最基本、使用最广泛的一种技术。 CZE的理论是其它CE方法的理论模板。 2.影响CZE迁移速率的因素（操作条件的选择） （1）操作电压 操作电压与毛细管的内径和长度