[医药卫生]ELISA检测技术要点与常见问题.pdf

城乡对口支援临床检验技术标准制定及培训 Program of Urban and Rural Counterpart Support on Clinical Laboratory Technology Standard Development and Training ELISA检测技术要点与常见问题 关 明 复旦大学附属华山医院 检验科 内 容 概念 实际工作中常见问题 酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA) 反应原理 试剂盒组成 操作中注意事项 室内质量控制 完善ELISA检测的质量保证体系 常见问题原因分析及解决 金标法 反应原理、优点和缺点 导致假阴性和假阳性的影响因素 建立质量保证体系 ELISA 的原理 • ELISA属于标记免疫学技术的一种，1971年由荷 兰和瑞典的学者提出，操作过程简单易行并可以 定量，从而使其在免疫学检测中得到了广泛的应 用。 • ELISA 关键：抗原或抗体的固相化及抗原或抗体 的酶标记。加入酶反应的底物后，底物被酶催化 成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量 直接相关，由此进行定性或定量分析。 常见问题 ELISA技术掌握不好较大的技术难题 白 板 花 板 灰 区 假 阴 性 假 阳 性 白 板 花 板 均 板 重复性 灰 区 竞争法 假阴性 ELISA检验方法相关项目 乙肝抗体 丙肝抗体 梅毒抗体 肿瘤标志物 性激素 甲状腺激素 ToRCH ELISA检验方法的原理 ELISA 常见类型 1.双抗体夹心法（用于测抗原）HBsAg 2.间接法（用于测抗体） HBsAb 3.竞争法（用于测小分子抗原/半抗原和抗体）HBeAb 4.捕获法（用于测血清中某抗体的亚型）特异IgG 钩状效应（hook effect） 一般情况下的双抗 体夹心法ELISA反应 抗原过量时 一步法ELISA反应会 出现钩状效应 钩状效应