[医学]生物化学 第11章 RNA的生物合成 2012.ppt

锤头核酶催化转酯化反应的机制 剪切点核苷酸糖基2?-OH对邻近的磷酸二酯键进行亲核攻击，产生二个产物，其一含有2?, 3?-环磷酸。 核酶对RNA的剪切作用 核酶通过与底物RNA的碱基互补形成酶-底物复合物，进而转化成酶-底物过渡态复合物，最后断裂成二个产物。 在其他单细胞生物体、线粒体、叶绿体的rRNA前体，一些噬菌体的mRNA前体及细菌tRNA前体也发现有这类自身剪接的内含子。 按剪接机制的不同可分为组Ⅰ内含子(group Ⅰ intron)和组Ⅱ内含子(group Ⅱ intron)。 组I、组II内含子的剪切 核酶研究的意义 核酶的发现，对中心法则作了重要补充； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶。 人工设计的核酶 粗线表示合成的核酸分子 细线表示天然的核酸分子 X 表示一致性序列 箭头表示切断点 5’ 3’ ori ori 5’ 3’ ori ori 复制叉运行方向 5’ 3’ 5’ 3’ * 这个新的G 残基以其它所有核苷酸定位方向相反的方向进入RNA 的末端。这种结构被称之为帽子(Cap)。它也是许多甲基化过程的底物。 第一种甲基化发生在所有真核生物中，在端部鸟嘌呤的7 位加上了一个甲基，仅仅拥有这样单一甲基的帽子被称为cap0。即使在单细胞真核生物中也发生这个甲基化反应。负责催化这种修饰反应的酶是鸟嘌呤-7-甲基转移酶(Methyltranferase)。 下一步是在倒数第二碱基(在没有任何修饰之前转录本真正的第一个起始碱基)的2`-O位置。此反应被另一个酶催化(2`-O-甲基-转移酶，2`-O-methyltransferase)，带有上述两个甲基的被称为cap1。除单细胞生物之外，这是一种多数的帽子形式。 第二个碱基再次发生甲基化，这是高等真核生物中的少数事件。仅当此碱基为腺嘌呤时这种甲基化才发生，被甲基化的是N6位。只有当腺嘌呤的2`-O 位已经甲基化时，负责此种甲基化的酶才能起修饰作用。 在真核mRNA 群体中所有分子都加帽，对于特定有机体，不同帽子类型的比例是其主要特征。对于一个特定mRNA 结构而言 在一些种类中，甲基被加到戴帽mRNA 的第三个碱基，这种反应的底物是已经带有两个甲基的cap1 mRNA。第三碱基的修饰通常是2`-O核糖的甲基化。这创造了cap2 类型。所有戴帽mRNA 中，此类帽子只占10~15%。 ，现在我们尚不知道是否可能有不止一种的帽。 在加帽过程中除了甲基化外，高等真核生物的mRNA 会低频率地发生内部甲基化。在每1000 个碱基中可能会产生一个N6甲基腺嘌呤残基，在典型的高等真核mRNA 中存在1~2个甲基腺嘌呤，它们的存在不是一定的，一些mRNA 并不带有甲基腺嘌呤。 5? pppGp… 5? GpppGp… pppG ppi 鸟苷酸转移酶 5? m7GpppGp… 甲基转移酶 SAM 帽子结构的生成过程： 5? ppGp… 磷酸酶 Pi 帽子结构的意义： 可以使mRNA免遭核酸酶的攻击； 也能与帽结合蛋白质复合体(cap-binding complex of protein)结合，并参与mRNA和核糖体的结合，启动蛋白质的生物合成。 （二）前体mRNA在3’端特异位点断裂并加上多聚腺苷酸尾 1. hnRNA 和 snRNA 核内的初级mRNA称为杂化核RNA (hetero-nuclear RNA, hnRNA) snRNA (small nuclear RNA) 核内的蛋白质 小分子核糖核酸蛋白体 （并接体, splicesome） snRNA 尾部修饰是和转录终止同时进行的过程。 poly A的有无与长短，是维持mRNA作为翻译模板的活性，以及增加mRNA本身稳定性的因素。 一般真核生物在胞浆内出现的mRNA，其poly A长度为100至200个核苷酸之间，也有少数例外。 前体mRNA分子的断裂和加多聚腺苷酸尾是多步骤过程。 慢速多聚磷酸化 AAUAAA G/U G/U G/U AAAAAAAAAAOH PAP AAAAAAAAAAOH AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAAOH Poly( a)信号 Poly( A) 位点 CPSF CPSF CPSF CFⅠ,CFⅡ, CStF CF1 CFⅡ CStF PAP CStF CFⅡ CF1 CPSF PAP 剪切 CPSF OH P PAP CStF ATP PPi 降解 P PABⅡ PABⅡ 快速多聚磷酸化 PABⅡ ATP PPi 断裂和聚腺苷酸化特异性因子 断裂因子，断裂激动因子 多聚腺苷酸聚合酶 多聚腺苷酸聚合蛋白Ⅱ 真核生物