[基础医学]基因的表达.pptVIP

恐龙图片 基 因 的 含 义 功能上：控制生物性状的遗传物质结构、功能的基本单位。 本质上（与DNA的关系）：具有遗传效应的DNA片段。 位置上（与染色体的关系）：在染色体上呈直线排列。 基因表达的现代概念是1961年提出的,在当时发现了信使RNA (mRNA) ,破解了遗传密码,阐述了蛋白质合成的基因调节。 70年代中期出现了全球性的基因表达研究的热点,80 年代得到了进一步的发展,发表的文章呈10 倍的速度增长。 90年代基因表达的研究又进入了一个新的时代。由于数据的充足、新技术的进步,大规模的DNA 的序列测定,目前已有更多的DNA 序列存在GenBank中。 生物医学的研究进入了一个新的转折点 ？ 了解了RNA的结构, RNA为什么能够成为DNA的信使? ？ 那么细胞中的 RNA是怎么产生的?DNA的遗传信息又是怎么传给mRNA的呢？ 基因对性状的控制 性状：生物形态结构和生理特征，由蛋白 质体现。 　Northern 杂交法( Northern blots) 　差减杂交技术( Subtractive hybridization technique) 高级有机物大约含50000～100000 个不同的基因,仅有15 %左右的基因在任何细胞都表达。随着生命过程的改变,如生长和分化、稳态、细胞周期的调节、老化和细胞凋亡,基因选择性的进行表达。 正常生长过程,疾病引起的病理改变如癌症,是否由单个基因突变引起,还是由多个基因复杂作用,通过基因表达的改变就可知道。 比较不同细胞类型基因表达的差异,就可以更好的了解控制我们生命的生物过程的信息。 随着认识的深入,人们开始思考细胞从静止期向增殖期过渡,其基因的表达是否差异,恶性肿瘤在不同时期表达有无不同。差减杂交技术也就在这种情况下产生了。 Lee 等应用该技术进行了肿瘤抑制侯选基因的研究,其过程为选择肿瘤细胞和其亲代正常细胞,在相同的条件下培养,抽提两种细胞的mRNA ,并将正常细胞的mRNA 异转录为32 P 标记的cDNA ,然后,将标记的cDNA 与10 倍的肿瘤细胞mRNA 第一次杂交,杂交混合液在60 ℃过羟基磷灰石柱,收集的流出液再与10 倍的肿瘤细胞mRNA第二次杂交,收集的最后流出液中去除了肿瘤mRNA 与正常细胞cDNA 相结合的杂交子,再与正常细胞的cDNA 文库进行筛选,最后将筛选出的克隆进行序列测定。这样就可初步筛选出肿瘤抑制侯选基因。同样也可用于其他侯选基因的初步筛选。 　差异显示法(Differential display) 用于区分不同细胞的mRNAs 的比较研究方法 Liang 和Pardee在差减杂交技术的基础上进行了改进,通过RT-PCR 扩增部分cDNA 序列,然后将这些短的序列展示于测序凝胶中,直接用于鉴定差异表达的基因。 这种技术主要用于: ①通过以短的cDNA条带的形式展示mRNA的亚型来观察细胞的mRNA的组成成分,并可同时运行两种标本; ②这些cDNAs 可快速测序,因此每一个mRNA 能稳定的获得标签,与数据库中的序列进行比较; ③单个条带能稳定获得,作为探针用于Northern 或southern 杂交,从cDNA 或基因组文库分离基因。 与差减差异杂交相比,差异显示技术有如下优点 ①更为快速,前者从细胞中分离克隆需要两个月的时间,包括mRNA的分离,cDNA文库的构建,递减,和通过差异杂交筛选。后者只需2天就可获得差异显示模式,5天时间进行克隆; ②差异显示技术能同时检测两个群体的表达基因的差异; ③差异显示技术更为敏感,因为引进了PCR 技术,只需1 μg 的mRNA 就可进行100 个涌道的电泳,比差减杂技术提高了50 倍。 　　基因表达芯片技术( cDNA Microarrays) 对于研究基因的表达差异,基因表达的系列分析是一种强有力的工具。 随着人类基因组计划的不断深入进行,基因组序列和表达的序列标签( EST) 的不断增加,人们将研究重心逐渐从“结构基因”向“功能基因”过渡,基因芯片技术也应运而生了。 生物芯片技术最早是由Fodor等提出的一种用于合成和分析生物分子的微型装置。 其原理是指通过微阵列(Microarray) 技术将高密度的cDNA 全长片段或ESTs 通过高速机器人以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面,将两种组织或细胞提取的总RNA 或mRNA 通过逆转录进行荧光标记,借助碱基互补配对原理与芯片进行杂交,再利用共聚焦激光扫描探测系统ScanARRAY System 进行扫描图像分析,最后计算机数据分析。 表达基因芯片技术可进行高通量、定量的对两种组织或细胞基因表达的平行分析。 随